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Biblioteca de cDNA - Coggle Diagram
Biblioteca de cDNA
É a coleção de fragmentos de cDNA clonados em vetores, representando todos os genes expressos de uma célula, tecido ou organismo em um momento específico
CONSTRUÇÃO
- Síntese da segunda fita. Exemplo: DNA polimerase + RNase H
- Inserção em vetor. Exemplo: Plasmídeo, fago ou fasmídeo
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- Transformação em hospedeiros. Exemplo: E.coli
- Extração do mRNA total da célula ou tecido
Tem como características importantes: representatividade dependente da abundância do mRNA, bibliotecas enriquecidas por tecido, estágio ou estímulo e menor complexidade que biblioteca genômica
PROPRIEDADES
Tecido-específica: Apenas os genes que estão sendo expressos naquele tipo específico de célula ou tecido no momento da coleta.
Temporal: Reflete os genes expressos no momento específico do desenvolvimento, ciclo celular ou condição fisiologica.
Dinâmica: Reflete expressão, não o genoma fixo
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HISTÓRICO
1976: Efstratiadis et al. sintetizam pela primeira vez, cDNAs de fita dupla completos a partir de mRNAs purificados de coelhos.
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LIMITAÇÕES
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Não inclui sequências reguladoras ( promotores, íntrons)
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