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coltivazione microrganismi pt 2 - Coggle Diagram
coltivazione microrganismi pt 2
coltivazione
materiale-->analisi
fasi
preparazione e sterelizzazione
semina campione
scalta del terreno
incubazione
conservate o eliminate
terreni di coltura
terreni disidratati
manipolati con precauzioni
durano per anni
formulazioni standardizzate
specifiche esigenze ricerca = formulazioni semplici
crescere microrganismi
terreni pronti per l'uso
tempo limitato
conservati a basse temperature
no problemi allestimento
terreni solidificati
agar = proprietà-->impiego
terreni liquidi
terreni disidratati = agar miscelato
terreni liquidi = provetta/beuta
terreni solidificati = impiegati in piastra/provetta
agar inclinato o agar slope
preparazione e conservazione
individua volume
18-20ml terreno agarizzato / piastre petri 90mm
40ml terreno agarizzato / piastre petri 120mm
Vtot = moltiplicare V distribuire
quantità polvere
V-polvere-->1000ml = proporzione
predisposizione volume
cilindro versa in beuta
acqua distillata
controllo pH
aggiustamento = aggiunta HCl/NaOH (goccia a goccia)
non superiore a 50°C
uso pHometro
sterelizzazione
volume -1L a 121°C per 15'
coltura sterile (autoclave)
piastramento e solidificazione
bunsen o sotto cappa = solidificazione
travasati in contenitori sterili
conservazione
in frigorifero (4°C)
tecniche di semina
agar slope
superficie interfaccia -aria
-rischio disidratazione/contaminazione
conserva ceppi microbici
ansa=striscio basso-->alto
terreni liquidi
traferimento volumi noti
crescità microrganismi arrichire colture
semina in piastra
colonie osservabili macroscopicamente
striscio
strisci ravvicinati-->sfrutta spazio
isolare specie da campioni polimicrobici
preleva inoculo con ansa-->terreno (zigzag)
separa singole cellule = colonie isolate
spatolamento
centro terreno goccia sospensione microbica
distribuita sulla superficie (singole cellule)
mezzo liquido
inclusione
sospese liquido-->trasfermento volumi precisi
cellule non eccessive e distribuite-->colonie separate
contrario = diluzioni successive
metodi di conta=numero microrganismi nel campione
infissione
ago sterile = inoculare terreni solidificati verticalmente
osserva proprietà microrganismi
metodi di incubazione
controllate temperatura e atmosfera
rispettare temperature
opera condizioni costanti
incubatori termostatati
+complesso=condizioni atmosfera controllata
tecniche coltivazione anaerobi
anaerobi obbligati
ucciso dall'ossigeno
crescono con ossigeno atmosferico
microaerofili
-O2 +CO2
crescita = rispettare adattamenti atmosfere
atmosfere modificate
rappresentato=giare anaerobiosi
ossigeno atmosferico eliminato-->reattivi chimici in buste
crescità microbica
crescita in piastra
crescita su agar inclinati
crescita in bordo
conservazione culture
congelamento
sviluppa sistemi di fialette con soluzione nutriente
dopo eleminazione del liquido-->congelatore
preserva cellule dai danni dei cristalli di ghiaccio
liofilizzazione
2 passaggi
congelamento
sublimazione
patina microbica sospesa in soluzione criopreservante
eleminazione acqua dalle cellule
inserita in fiale sterili
congela-->froma cristalli ghiaccio=liofilizzatore
conservazione rifrigerata
trasferisce in frigo-->conservazione
inocula ceppo da conservare sul terreno-->incuba
allestimento automatizzato
favorisce precisione analitica e riproducibilità risultati
apparecchiatura inoculazione
piastre nel incubatore
termine=immagini digitali
messe in piastra nel terreno
destinare piastre-->colonie d'interesse
vassoi con provette con campioni
-intervento operatore