Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Microplate Reader - Coggle Diagram
Microplate Reader
ข้อควรระวังในการใช้ Microplate Reader
การเลือกความยาวคลื่น
เลือกคลื่นให้ตรงกับชนิดการทดสอบ
เลือกผิดคลื่น = ค่าเพี้ยนทันที
~260 nm → DNA/RNA
~280 nm → โปรตีน
~450 nm → ELISA (TMB stop)
Background / Reference
ต้องมี Blank ไม่มี blank = ค่าคลาดเคลื่อน
บางเทคนิคต้องอ่าน 2 คลื่น เช่น 450–630 nm
ใช้ตัดสัญญาณพื้นหลังจากเพลท/สารละลาย
ฟองอากาศ & ความสะอาดเพลท
ฟองอากาศทำให้แสงหักเห → ค่า OD ผิด
คราบสกปรก/ลายนิ้วมือใต้เพลท รบกวนการอ่านค่า
ปริมาตรและความสม่ำเสมอ
ทุกหลุมควรมีปริมาตรใกล้เคียงกัน
ปริมาตรน้อยเกินไป → ชั้นของของเหลวบาง → ค่าแกว่ง
การจัดตำแหน่งเพลท
วางเพลทให้ถูกทิศ ไม่กลับด้าน
ตรวจตำแหน่ง well ในโปรแกรมก่อนอ่านค่า
ใส่ผิดตำแหน่ง = ข้อมูลสลับหลุม
การตั้งค่าโหมดการวัด
เลือกโหมดให้ตรงงาน
End-point → อ่านครั้งเดียวหลังปฏิกิริยาจบ
Kinetic → อ่านหลายครั้งตามเวลา (ดูอัตราการเปลี่ยนแปลง)
การบำรุงรักษาเครื่อง
เช็ดช่องอ่านแสง ไม่ให้มีฝุ่น
อุ่นเครื่องก่อนใช้ (ถ้าคู่มือกำหนด)
หลีกเลี่ยงสารเคมีหกใส่เครื่อง
ประโยชน์และการประยุกต์ใช้
งานชีววิทยา/ชีวเคมี
ตรวจโปรตีน เช่น BCA, Bradford
ตรวจ DNA/RNA (อ่านที่ ~260 nm)
วัดกิจกรรมเอนไซม์ และการทำปฏิกิริยาแบบ end-point หรือ kinetic
งานภูมิคุ้มกันวิทยา & การแพทย์
การคัดกรองตัวอย่างจำนวนมาก
ELISA สำหรับตรวจแอนติเจน/แอนติบอดี
งานเพาะเลี้ยงเซลล์ & เภสัชวิทยา
ทดสอบความมีชีวิตของเซลล์ เช่น MTT, CCK-8/WST-8
คัดกรองฤทธิ์ยา/ความเป็นพิษของสาร
งานอุตสาหกรรม/อาหาร/สิ่งแวดล้อม
ELISA สำหรับตรวจแอนติเจน/แอนติบอดี
งาน QC ที่ต้องวัดซ้ำหลายตัวอย่างพร้อมกัน
จุดเด่น
วัดได้เร็ว
วัดพร้อมกันได้
หลายตัวอย่าง
ใช้ปริมาตรสารน้อย
ประหยัดรีเอเจนต์
หลักการ
Microplate
แผ่นหลุมขนาดเล็ก (เช่น 96 หลุม, 384 หลุม) ใช้ใส่สารตัวอย่าง/สารรีเอเจนต์หลาย ๆ ตัวอย่างพร้อมกัน
Microplate Reader
เครื่องอ่านค่าสัญญาณจากแต่ละหลุม
แสงที่ความยาวคลื่นเฉพาะถูกยิงผ่านหลุม
สารในหลุมดูดกลืน/ปล่อยแสง
เซนเซอร์ตรวจจับสัญญาณ
แปลงเป็นค่า OD/Intensity เพื่อนำไปคำนวณความเข้มข้นหรือกิจกรรมของปฏิกิริยา