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GIBBERELLINE (GA), repressore: dall'analisi di mutante slndr si è…
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repressore: dall'analisi di mutante slndr si è visto che i geni coinvolti codificavano per questa proteina ortologa a repressore
identificazione di questo repressore: dallo studio dei mutanti si è visto che i geni che erano coinvolti codificavano delle proteine (repressori) ortologhe (evolutivamente affini) a dei repressori della trascrizione -> repressori GRAS (dalle iniziali delle prime proteine scoperte). Sono repressori che hanno: dominio della= regolatorio= interagisce con GA legata la recettore (DELLA sono i primi 5 a.a.); dominio gras= funzionale= interagisce con il promotore. hanno una sequenza di localizzazione nucleare che permette l'interazione con i pori nucleari e l'importazione nel nucleo-> identificata con gene reporter assay con GFP.
mutante slender snello: ha una crescita eccessiva> mutazioni a carico del dominio GRAS= perché il repressore non si può legare al promotore-> determina un espressione costitutiva del gene-> effetto fenotipico: crescita non controllata.
riso e orzo hanno un solo gene per il repressore di dominio della-> perciò non ci possono essere effetti di compensazione -> riso
invece arabidosis ha ben 5 geni-> back up con compensazione
mutante nano: mutazione a carico di della= anche in presenza di GA, questa (legata al recettore) non si può legare al repressore, quindi non ne può indurre il cambio conformazionale che ne determinerebbe il distacco dal DNA --> effetto fenotipico: non c'è crescita.
green revolution: mutante nano e seminano di cereali-> selzionati perché migliore risposta all'ALLETTAMENTO
mutanti gid 2 e sly 1 -> hanno fenotipo nano a causa di mutazioni dei geni SCF --> non c'è la poliubiquitinazione del repressore, che quindi non viene rimosso -> non c'è la crescita in altezza
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repressori dei geni controllati da GA: RGA, GAI; di dominio della e gras. -> geni della crescita e dell'alfa amilasi
gene reporter assay con GFP-> cellule trasformate con costrutto chimerico promotore di RGA e gene GFP --> espressa nel nucleo.
- trattando con GA esogena -> scompare la fluorescenza= RGA è soggetta a proteolisi <--- infatti: quando c'è la GA, c'è espressione dei geni costituviamente repressi da RGA
- viceversa se viene trattata con sostanza che inibisce la sintesi di GA -> c'è un'iper espressione della fluorescenza-> iperespressione di RGA
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