Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
méthode et outil d'analyse du génome - Coggle Diagram
méthode et outil d'analyse du génome
le matériel biologique et le choix de la cible
diverses sources de matériel biologique
le sang
les prélèvement jugaux
les tissus frais
les blocs histologique archivés
les cellule en culture
deux types de recherches de mutations
mutations constitutionnelles
présente dans toutes les cellules de l'organisme, elles sont recherchées pour le dépistage des prédispositions génétiques
mutations somatique
présent uniquement au niveau de la tumeur, elles servent à la caractérisation oncologique
le choix entre l'analyse l'ADN ou de l'ARN
ADN
très stable, facile à préparer et permet l'étude des introns
ARN
Cible plus courte, idéale pour la détection directe des défauts dépistage, mais caractérisée par une grande instabilité
extraction et purification des acides nucléiques
protocole de purification des acides nucléiques
extraction
séparation des acides nucléiques des contaminants via les solvants organiques comme le phenolchloroforme ou par chromatographie
précipitation
utilisation d'alcool pour concentrer l'ADN ou l'ARN sous forme de pelote ou de méduse
lyse cellulaire et dénaturation
traitements mécaniques ou chimiques + des agents chaotropes et la protéines K sont ajoutés pour inactiver les nucléases intracellulaires
Précautions pour l'ARN
extrêmement vulnérable au RNAses, enzyme ubiquitaire
l'extraction nécessite des gants, des solutions stériles, d'inhibiteurs de RNAses et une conservation à -80°C
évolution historique de la génétique moléculaire
progression majeure début du XIX siècle
1865
découverte des lois de l'hérédité par Gregor Mendel
1953
description de la structure en double hélice de l'ADN par James Watson et Francis Crick
s'appuyant sur les travaux de Rosalind Franklin sur la diffraction des rayons X
1985
invention de la PCR par Kary Mullis permettant l'amplification ciblée de l'ADN
2004
achèvement du séquençage du génome humain et évènement des analyses pan-génomiques
controle qualité et quantification
spectrophotométrie (UV)
les bases absorbent à 260nm
une solution d'ADN double brin à 50microg/mL correspond à une unité d'absorbance
la pureté est évaluée par le rapport A260/A280
un échantillon pure présente un rapport d'environ 1,8 à 2 pour l'ADN à 2,2 pour l'ARN
l'électrophorèse
permet de vérifier l'intégrité moléculaire sur gel d'àgarosê ou sur puce
pour l'ARN on calcule le RIN sur une échelle de 0 à 10 en observant le rapport entre les bandes ribosomes 28S et 18S
rappel sur la structure des acides nucléiques
nucléotides
base azotée
adénine, guanine, cytosine, thymine et gracile
sucre
désoxyribose pour l'ADN et ribose pour l'ARN
groupement phosphate
outil enzymatiques : "les ciseaux" moléculaires
les nucléases
nucléaires S1
dégrade spécifiquement l'ADN ou l'ARN simple brin
DNase I
coupe l'ADN de manière aléatoire en hydrolysant les liaisons phosphodiesters
les enzymes de restrictions (type II)
produite naturellement par les bactéries comme mécanisme de défense contre les virus
coupent l'ADN au niveau de sites de reconnaissance spécifiques, souvent palindromique
nomenclature
le nom provient du genre, de l'espèce, de la variété et e l'ordre de découverte
type de coupure