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Variantes de PCR, XAVIER ALEJANDRO CARATACHEA NAVARRO
BIOLOGÍA MOLECULAR
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Variantes de PCR
PCR
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Ciclos repetidos de:
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Extensión: la DNA polimerasa termoestable, ej., sintetiza la nueva hebra.
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PCR multiplex
Fundamento: en una misma reacción se usan múltiples pares de cebadores, cada uno para un blanco diferente → se amplifican varios fragmentos de ADN simultáneamente.
Requisito crítico: optimizar cebadores para que todos funcionen a una misma temperatura de alineamiento y no formen dímeros.
Ventajas: ahorra tiempo, reactivos y muestra.
Aplicaciones: detección simultánea de varios patógenos, análisis de deleciones/duplicaciones, genotipificación de múltiples loci en un solo tubo
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PCR anidada (Nested PCR)
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Objetivo: aumentar muchísimo la especificidad y sensibilidad, reduciendo productos inespecíficos.
Aplicaciones: detección de patógenos con ADN muy escaso o degradado (ej. Mycobacterium tuberculosis, virus difíciles de detectar).
PCR digital (dPCR)
Fundamento: la mezcla se divide en miles de micro-reacciones (gotas o compartimentos); cada una contiene 0 o 1 molécula de ADN diana.
Se cuenta cuántas reacciones son positivas vs. negativas → se obtiene cuantificación absoluta (sin necesidad de curvas estándar).
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Aplicaciones: detección de mutaciones raras en cáncer, cuantificación precisa de copias génicas, estudios de mosaicismo.
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PCR in situ
Fundamento: la amplificación ocurre dentro de células o tejidos fijados, manteniendo la localización espacial de la señal.
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Aplicaciones: localización de genomas virales o genes específicos en cortes de tejido, correlacionando expresión con morfología histológica.
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