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BIOMOLÉCULAS - Coggle Diagram

- - - - Movimento de partículas carregadas em um campo elétrico. A velocidade depende de:
        
        Forma;
        
        Força do campo elétrico;
        
        Tamanho;
        
        Viscosidade e composição do gel.
        
        Carga da molécula;
    - - Eletroforese em gel de agarose
        
        Usada para separar fragmentos de DNA ou RNA;
        
        As moléculas migram:
        
        os ácidos nucleicos são negativamente carregados (grupos fosfato).
        
        A velocidade de migração depende do tamanho e conformação das moléculas.
        
        do eletrodo negativo (cátodo) → para o eletrodo positivo (ânodo),
        
        Requer um corante intercalante de bases nitrogenadas (risco carcinogênico).
      - Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)
        
        Usada para separação de proteínas
        
        Eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio
        
        SDS
        
        Persulfato de Amônio
        
        Tris
        
        TEMED
        
        Acrilamida
    - - A eletroforese é uma técnica utilizada para análise; geralmente, as moléculas separadas não são reutilizadas.
      - Transiluminador ou fotodocumentador
  - - - Ponto isoelétrico;
    - - separação com base na solubilidade de cada composto
    - - A separação é baseada na interação eletrostática entre:
        
        os grupos carregados da matriz da coluna (fase estacionária);
        
        as cargas superficiais das moléculas (fase móvel).
      - Moléculas de carga oposta à da coluna se ligam; moléculas de mesmo sinal passam direto.
      - Obs.: a carga de uma proteína depende do tampão em que ela está.
    - - A separação se baseia na força das interações hidrofóbicas entre as superfícies apolares das proteínas e os grupos hidrofóbicos presentes na fase estacionária (a matriz da coluna).
        
        Essas interações são favorecidas por alta força iônica (alta concentração de sal), e enfraquecidas quando o sal é reduzido.
    - - A separação ocorre com base no tamanho das moléculas em solução.
      - A fase estacionária é formada por microesferas porosas.
      - As moléculas são separadas sem interação química, apenas por exclusão física dos poros.
        
        Moléculas grandes → não entram nos poros → passam mais rápido → eluem primeiro.
        
        Moléculas pequenas → entram nos poros → caminho mais longo → eluem depois.
      - Curva de calibração:
        
        Relativa à coluna, ao tampão utilizado e as condições do experimento em questão;
    - - A separação ocorre com base na afinidade específica entre duas moléculas que interagem naturalmente
        
        enzima ↔ substrato;
        
        receptor ↔ ligante;
        
        proteína ↔ tag.
        
        anticorpo ↔ antígeno;
      - Somente a molécula de interesse (que reconhece o ligante da coluna) se liga. As demais passam direto.