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I VARI MODI DI EFFETTUARE UN ANTIBIOGRAMMA - Coggle Diagram
I VARI MODI DI EFFETTUARE UN ANTIBIOGRAMMA
INTRO
I CAMPIONI RACCOLTI POSSONO ESSERE DI VARIE TIPOLOGIE:
BRONCOASPIRATO;
TAMPONI EFFETTUATI SULLE FERITE;
URINE X L’URINOCOLTURA;
LIQUIDO PLEURICO O PERITONEALE.
SANGUE X LE EMOCOLTURE;
TALE ANALISI CONSENTE DI ORIENTARE LA TERAPIA ANTIMICROBICA IN MODO MIRATO,
FAVORENDO L’IMPIEGO RAZIONALE DEGLI ANTIBIOTICI E CONTRIBUENDO AL CONTENIMENTO DEL FENOMENO DELL’ANTIMICROBICO-RESISTENZA (AMR).
LE INDICAZIONI X IL PRELIEVO POSSONO ESSERE DIVERSE, MA IN LINEA GENERALE È INDICATA UNA COLTURA IN PRESENZA DI SEGNI E SINTOMI CHE POSSANO FAR SOSPETTARE UN’INFEZIONE, COME:
FEBBRE, INDICI DI FLOGOSI IN AUMENTO, EMODINAMICA INSTABILE O SINTOMI COME BRUCIORE ALLA MINZIONE O FUORIUSCITA DI MATERIALE PURULENTO DA UNA FERITA.
L’ANTIBIOGRAMMA È UN ESAME DI LABORATORIO FONDAMENTALE X LA VALUTAZIONE DELLA SENSIBILITÀ O DELLA RESISTENZA DEI MICRORGANISMI AI DIVERSI ANTIBIOTICI.
PRINCIPALI METODI X EFFETTUARE L’ANTIBIOGRAMMA (IN BASE ALLA METODOLOGIA E AGLI OBIETTIVI DEL TEST):
ANTIBIOGRAMMA QUANTITATIVO
DILUIZIONE IN BRODO
DIFFERENZA MIC E MBC
LA MIC INDICA LA CONCENTRAZIONE DI ANTIBIOTICO CHE FERMA LA CRESCITA BATTERICA, MA NON NECESSARIAMENTE PROVOCA LA MORTE DELLE CELLULE.
LA MBC INDIVIDUA LA CONCENTRAZIONE CHE PROVOCA LA MORTE EFFETTIVA DEI BATTERI.
DOPO L'INCUBAZIONE, IL CONTROLLO DELLA CRESCITA BATTERICA VIENE FATTO OSSERVANDO LA TORBIDITÀ DEL BRODO (CHE AUMENTA CON LA CRESCITA BATTERICA).
IN OGNI PROVETTA SI INOCULA IL BATTERIO
SI AGGIUNGE L'ANTIBIOTICO IN CONCENTRAZIONI DECRESCENTI (DALLA + ALTA ALLA + BASSA).
QUESTA “SCALA” DI CONCENTRAZIONI PERMETTERÀ DI IDENTIFICARE IL PUNTO ESATTO IN CUI IL BATTERIO SMETTE DI CRESCERE
LE PROVETTE VENGONO INCUBATE A 37 °C X 24H
OCCORRE ALLESTIRE UNA SERIE DI PROVETTE CONTENENTI UN TERRENO DI COLTURA LIQUIDO ADATTO ALLA CRESCITA DEL BATTERIO
INTERPRETAZIONE DEL RISULTATO
UNA VOLTA MISURATA LA MIC È POSSIBILE ANCHE DETERMINARE LA CONCENTRAZIONE MINIMA BATTERICIDA (MBC),
OSSIA LA CONCENTRAZIONE MINIMA DI ANTIBIOTICO NECESSARIA + UCCIDERE + DEL 99.9% DEI BATTERI PRESENTI.
SI RISCONTRERÀ UNA PROGRESSIVA DIMINUZIONE DELLA TORBIDITÀ DEL TERRENO MAN MANO CHE LA CONCENTRAZIONE DELL’ANTIBIOTICO AUMENTA.
LA 1° PROVETTA INDIVIDUATA CONTENENTE UN TERRENO LIMPIDO, CORRISPONDE ALLA MINIMA CONCENTRAZIONE DI ANTIBIOTICO IN GRADO DI INIBIRE LA CRESCITA BATTERICA (MIC) -> CRESCITA BATTERICA ASSENTE
LE PROVETTE CON UNA MINORE CONCENTRAZIONE DI ANTIBIOTICO PRESENTERANNO UNA MAGGIORE TORBIDITÀ -> CRESCITA BATTERICA PRESENTE
FASI X LA DETERMINAZIONE DELLA MBC
2.LE PIASTRE VENGONO INCUBATE (ES. 24 ORE A 37 °C)
1.DOPO AVER ESEGUITO IL TEST DELLA MIC, SI TRASFERISCE UNA GOCCIA DA CIASCUNA PROVETTA (O PIASTRA) SENZA CRESCITA SULLA SUPERFICIE DI PIASTRE CONTENENTI TERRENO SOLIDO (AGAR) SENZA ANTIBIOTICO -> X CAPIRE SE I BATTERI RIESCONO A MOLTIPLICARSI.
LA MBC PUÒ ESSERE UGUALE O MAGGIORE DELLA MIC.
SI OSSERVA LA CRESCITA BATTERICA SU OGNI PIASTRA:
-NESSUNA CRESCITA BATTERICA → I BATTERI ERANO STATI UCCISI, QUELL’ANTIBIOTICO È BATTERICIDA A QUELLA CONCENTRAZIONE. IL 1° TERRENO IN CUI NON VIENE RISCONTRATA CRESCITA BATTERICA CORRISPONDE ALLA PROVETTA CONTENENTE UNA QUANTITÀ DI ANTIBIOTICO SUFFICIENTE X UCCIDERE TUTTI I BATTERI PRESENTI AL SUO INTERNO (MBC).
CRESCITA BATTERICA PRESENTE → SIGNIFICA CHE LA CONCENTRAZIONE DI ANTIBIOTICO IN QUELLA PROVETTA NON È STATA SUFFICIENTE A UCCIDERE I BATTERI, MA SOLO A INIBIRLI. QUINDI, LA MBC SARÀ SUPERIORE A QUELLA CONCENTRAZIONE.
CI SONO 2 PRINCIPALI MODALITÀ X ESEGUIRE LA DILUIZIONE:
DILUIZIONE IN BRODO (LIQUIDO)
DILUIZIONE SU PIASTRA SOLIDA
UTILIZZA IL METODO X DILUIZIONE, CHE CONSENTE DI DETERMINARE CON PRECISIONE LA CONCENTRAZIONE MINIMA INIBENTE (MIC).
DILUIZIONE SU PIASTRA SOLIDA
LA MIC CORRISPONDE ALLA + BASSA CONCENTRAZIONE DI ANTIBIOTICO SULLA PIASTRA IN CUI NON SI OSSERVA ALCUNA CRESCITA BATTERICA VISIBILE.
LE PIASTRE VENGONO INCUBATE ALLA TEMPERATURA ADATTA AL BATTERIO (ES. 37 °C PER 18-24 ORE) X PERMETTERE LA CRESCITA.
SU CIASCUNA PIASTRA SI INOCULA UNA QUANTITÀ STANDARDIZZATA DEL BATTERIO DA TESTARE, DI SOLITO UNA SOSPENSIONE A DENSITÀ NOTA.
DOPO L'INCUBAZIONE, SI OSSERVA LA CRESCITA BATTERICA SU CIASCUNA PIASTRA
SI PREPARANO + PIASTRE DI AGAR, CIASCUNA CONTENENTE UNA DIVERSA CONCENTRAZIONE DI ANTIBIOTICO.
LE CONCENTRAZIONI SONO DECRESCENTI IN MODO DA POTER OSSERVARE A QUALE LIVELLO L’ANTIBIOTICO INIBISCE LA CRESCITA.
A DIFFERENZA DI
KIRBY-BAUER
(QUALITATIVO -- SEMIQUANTITATIVO)
QUI
SI CONOSCE LA
CONCENTRAZIONE PRECISA
NECESSARIA PER INIBIRE I BATTERI.
ANTIBIOGRAMMA AUTOMATIZZATO
L’INTERPRETAZIONE DEI VALORI OTTENUTI AVVIENE SECONDO I CRITERI STABILITI DAI PRINCIPALI COMITATI INTERNAZIONALI DI RIFERIMENTO, QUALI EUCAST (EUROPEAN COMMITTEE ON ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY TESTING) O CLSI (CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE), CHE DEFINISCONO LE SOGLIE DI SENSIBILITÀ X CIASCUN ANTIBIOTICO E MICRORGANISMO.
ANALISI DEI RISULTATI: UNA VOLTA COMPLETATO IL TEST, IL SISTEMA FORNISCE AUTOMATICAMENTE IL VALORE DELLA MIC (MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATION), IL QUALE VIENE ASSOCIATO ALL’IDENTIFICAZIONE DEL MICRORGANISMO, CHE È STATA PRECEDENTEMENTE EFFETTUATA DAL SISTEMA.
PANNELLI O CARD CON VARI ANTIBIOTICI: IL CAMPIONE VIENE SOTTOPOSTO A UN PANNELLO O UNA "CARD" CONTENENTE DIVERSI ANTIBIOTICI.
OGNI ANTIBIOTICO È ASSOCIATO A UNA CONCENT. PREDETERMINATA.
IL SISTEMA TESTA L'EFFICACIA DI CIASCUN ANTIBIOTICO CONTRO I BATTERI PRESENTI NEL CAMPIONE.
LETTURA AUTOMATIZZATA: IL SISTEMA MONITORA CONTINUAMENTE LA CRESCITA BATTERICA.
LA LETTURA PUÒ AVVENIRE TRAMITE SENSORI OTTICI CHE RILEVANO CAMBIAMENTI NEL DEL MEZZO DI COLTURA (UN INDICATORE DELLA CRESCITA BATTERICA) O ATTRAVERSO TECNICHE FLUORIMETRICHE CHE MISURANO LA FLUORESCENZA ASSOCIATA ALLA CRESCITA BATTERICA.
QUESTI SEGNALI VENGONO UTILIZZATI PER DETERMINARE SE I BATTERI SONO SENSIBILI O RESISTENTI AGLI ANTIBIOTICI TESTATI.
PREPARAZIONE DEI CAMPIONI: COME NEI METODI TRADIZIONALI, IL CAMPIONE BIOLOGICO VIENE PRELEVATO DAL PAZIENTE E SUCCESSIVAMENTE INOCULATO SU UN SUPPORTO DI CRESCITA X CONSENTIRE LA PROLIFERAZIONE DEI BATTERI.
ALCUNI LABORATORI DI MICROBIOLOGIA UTILIZZANO SISTEMI AUTOMATIZZATI COME VITEK, PHOENIX O MICROSCAN,
CHE PERMETTONO DI ESEGUIRE UNA SERIE DI TEST PER L’IDENTIFICAZIONE DEI MICRORGANISMI E LA DETERMINAZIONE DELLA SENSIBILITÀ AGLI ANTIBIOTICI IN MODO RAPIDO, CON LETTURA E ANALISI AUTOMATIZZATE DEI RISULTATI.
METODO E-TEST
LA STRISCIA CONTIENE UN GRADIENTE NOTO E CONTINUO DI CONCENTRAZIONI DI ANTIBIOTICO, CHE AUMENTA LUNGO LA SUA LUNGHEZZA.
DURANTE L’INCUBAZIONE, L’ANTIBIOTICO DIFFONDE NEL TERRENO CREANDO UN’ELLISSE DI INIBIZIONE ATTORNO ALLA STRISCIA.
SU UNA PIASTRA DI AGAR INOCULATA CON IL BATTERIO DA TESTARE VIENE APPLICATA UNA STRISCIA DI PLASTICA (
E-STRIP
).
RAPPRESENTA UNA
COMBINAZIONE
TRA IL
METODO DI DIFFUSIONE SU AGAR
E
QUELLO DELLA DILUIZIONE
,
PERCHÉ PERMETTE DI OTTENERE UN VALORE NUMERICO PRECISO DELLA MIC TRAMITE DIFFUSIONE.
È UN ANTIBIOGRAMMA PARTICOLARMENTE UTILE QUANDO SERVE CONOSCERE CON PRECISIONE LA MIC, AD ES X:
ANTIBIOTICI SPECIFICI (VANCOMICINA, COLISTINA ECC.)
PAZIENTI GRAVI IN CUI LA DOSE VA CALIBRATA IN MODO PRECISO
MICRORGANISMI DIFFICILI DA TESTARE CON I DISCHI
È UNA TECNICA UTILIZZATA X DETERMINARE LA
CONCENTRAZIONE MINIMA INIBENTE (MIC)
DI UN ANTIBIOTICO.
IL PUNTO IN CUI IL MARGINE DELL’ELLISSE TOCCA LA SCALA GRADUATA SULLA STRISCIA INDICA DIRETTAMENTE LA
MIC
.
ANTIBIOGRAMMA QUALITATIVO
DOPO L’INCUBAZIONE SI MISURANO I DIAMETRI DELLE ZONE DI INIBIZIONE, OVVERO LE AREE PRIVE DI CRESCITA BATTERICA ATTORNO AI DISCHETTI. LA GRANDEZZA È DIRETTAMENTE CORRELATA ALLA SENSIBILITÀ DEL BATTERIO AL FARMACO.
SULLA PIASTRA INOCULATA SI POSIZIONANO DISCHETTI DI CARTA IMPREGNATI CON CONCENTRAZIONI STANDARD DI DIVERSI ANTIBIOTICI
SI PREPARA UNA SOSPENSIONE BATTERICA STANDARDIZZATA E LA SI DISTRIBUISCE UNIFORMEMENTE SULLA SUPERFICIE DI UNA PIASTRA DI AGAR
VIENE ESEGUITO MEDIANTE LA TECNICA DELLA DIFFUSIONE SU AGAR, UTILIZZANDO GENERALMENTE IL METODO DI KIRBY-BAUER -> STANDARD + DIFFUSO NEI LABORATORI DI MICROBIOLOGIA CLINICA.
LA PIASTRA VIENE INCUBATA A 35°C X CIRCA 18–24 ORE
X CIASCUN ANTIBIOTICO SI CLASSIFICA LA RISPOSTA DEL MICRORGANISMO COME: SENSIBILE (S), INTERMEDIO (I) O RESISTENTE (R). LA CLASSIFICAZIONE AVVIENE CONFRONTANDO I DIAMETRI MISURATI CON LE TABELLE STANDARD DI INTERPRETAZIONE (CLSI O EUCAST).
LA TECNICA KIRBY-BAUER DEVE ESSERE UTILIZZATA:
NON È ADATTA PER BATTERI A CRESCITA LENTA, CHE NECESSITANO DI NUTRIENTI SPECIALI O CHE RICHIEDONO CO2 O INCUBAZIONE ANAEROBICA;
DEVE ESSERE NECESSARIAMENTE ASSOCIATA ALLA METODICA X DILUIZIONE PER IDENTIFICARE LA MINIMA CONCENTRAZIONE INIBENTE (MIC).
SOLO X SPECIE BATTERICHE BEN VALUTATE;