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ANALISI MICROBIOLOGICA DEGLI ALIMENTI - Coggle Diagram
ANALISI MICROBIOLOGICA DEGLI ALIMENTI
INTRO
MA LA MAGGIOR PARTE DEGLI ENTEROBATTERI NON SONO COLIFORMI.
QUINDI SONO COLIFORMI: ESCHERICHIA COLI (coliforme fecale), KLEBSIELLA spp, ENTEROBACTER spp, CITROBACTER spp
TUTTI I COLIFORMI APPARTENGONO ALLA FAMIGLIA ENTEROBACTERIACEAE.
I COLIFORMI SONO BATTERI GRAM NEGATIVI, A FORMA DI BASTONCINO, NON SPORIGENI, CHE:
FERMENTANO IL LATTOSIO
PRODUCONO GAS
L'ANALISI MICROBIOLOGICA DEGLI ALIMENTI HA LO SCOPO DI RICERCARE ENTEROBACTERIACEE, COLIFORMI E POSSIBILI PATOGENI INTESTINALI, X VALUTARE L'IGIENE E LA SICUREZZA DEL PRODOTTO
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE
LO SCOPO DELL'OMOGENEIZZAZIONE E' QUELLO DI TRASFERIRE LE CELLULE MICROBICHE DALLA MATRICE ALIMENTARE AL DILUENTE, IN MODO CHE SIANO SOSPESE IN ESSO.
LA MISCELA ALIMENTO + DILUENTE VIENE OMOGENEIZZATA ALL'INTERNO DELL'OMOGENEIZZATORE PERISTALTICO, DETTO STOMACHER (X60 secondi) X ESTRARRE LE CELLULE DALLA MATRICE ALIMENTARE.
A CIASCUN CAMPIONE VIENE PRELEVATA UNA PORZIONE RAPPRESENTATIVA E TRASFERITA IN UNA BUSTA STERILE CON UN DILUENTE CHE PUO' ESSERE ACQUA O SOLUZIONE PEPTONE-SALINA (diluizione 1:10, 1 parte di alimento, 9 di diluente)
GLI ALIMENTI ARRIVANO CONFEZIONATI
QUESTA SOSPENSIONE VIENE POI UTILIZZATA X LE ANALISI.
I TERRENI CHE VENGONO UTILIZZATI X LE ANALISI SONO:
QUESTI 2 TERRENI OVVERO BRODO VERDE BILE BRILLANTE E SELENITE, VENGONO USATI TIPICAMENTE X I CRUDI.
X I
COTTI
SI USA UNA SEMINA QUANTITATIVA SU:
ECTON
SERVE X:
CONTARE LA CARICA MICROBICA TOTALE
FAR CRESCERE QUALSIASI MICRORGANISMO NON ESIGENTE: COLIFORMI, ENTEROBATTERI, BATTERI AMBIENTALI, GRAM POSITIVI, LIEVITI, MUFFE
NON E' SELETTIVO-> CHIUNQUE PUO' CRESCERE
NON E' SPECIFICO X COLIFORMI
NON E' SPECIFICO X ENTEROBATTERI
E' UN TERRENO DI CRESCITA GENERALE
E' SEMPLICEMENTE UN TERRENO CHE "FA CRESCERE TUTTO"
HEKTOEN ENTERIC AGAR (HEK)
E' SELETTIVO X ENTEROPATOGENI INTESTINALI COME SALMONELLA e SHIGELLA; PERMETTE DI DISTINGUERE BATTERI GRAZIE A FERMENTAZIONE DEI CARBOIDRATI E PRODUZIONE DI H2S (colonies nere: H2S) (idrogeno solforato)
PRENDO L'ANSA, LA STERILIZZO CON LA FIAMMA, FACCIO LA SEMINA DI TIPO QUALITATIVO, PRENDO LA GOCCIA DI CAMPIONE DAL SACCHETTO E SEMINO. VIENE INCUBATO A 37 GRADI X 24 ORE. SCOPO: ISOLARE E IDENTIFICARE SALMONELLA, SHIGELLA E ALTRI ENTEROBATTERI INTESTINALI
TERRENO SOLIDO SELETTIVO E DIFFERENZIALE, MOLTO USATO NELLA DIAGNOSTICA ALIMENTARE.
2.
SELENITE (BRODO DI SELENITE)
NON E' UN TERRENO X COLIFORMI
IL SUO SCOPO NON E' ISOLARE I COLIFORMI MA ARRICCHIRE ANTEROBATTERI PATOGENI, SPECIALMENTE SALMONELLA
(PRELEVO LA SOPENSIONE OMOGENEIZZATA DAL SACCHETTO (10 ml) E LA METTO IN 90 ml DI SELENITE. E INCUBO A 37 GRADI X 24 ORE)
SERVE AD AUMENTARE LA PROBABILITA' DI RECUPERARE MICRORGANISMI TARGET PRESENTI IN BASSE CONCENTRAZIONI.
E' UN TERRENO DI ARRICCHIMENTO SELETTIVO USATO X AUMENTARE LA CARICA MICROBICA, PRIMA DI UN ISOLAMENTO SELETTIVO.
SERVE SOPRATTUTTO X:
AGISCE ANCHE SU: SHIGELLA (PUO' SOPRAVVIVERE MA MENO BENE) / ALTRI ENTEROBATTERI (POSSONO CRESCERE, MA VENGONO PARZIALMENTE INIBITI
SALMONELLA spp (SELETTIVAMENTE ARRICCHISCE SALMONELLA IN CAMPIONI DOVE MOLTI ALTRI BATTERI LA MASCHERANO)
1.
BORDO VERDE BILE BRILLANTE (O "BRILLIANT GREEN LACTOSE BILE")
CONTIENE:
SALI BILIARI
: INIBISCONO MOLTI GRAM POSITIVI E ALCUNI GRAM NEGATIVI NON ENTERICI;
LATTOSIO
: SOLO I COLIFORMI LO FERMENTANO. LA FERMENTAZIONE E' INDICE DI POSITIVITA' (presenza di coliformi), CON LA CONSEGUENTE RPODUZIONE DI GAS CHE POTRA' OSSERRVARE ALL'INTERNO DELLA CAMPANELLA NELLA PROVETTA (
*Tubicino Durham
->cattura il gas)
VERDE BRILLANTE
: INIBISCE MOLTI GRAM POSITIVI;
SI ANALIZZANO + PROVETTE CONTENENTI QUESTO BRODO A DIVERSE DILUIZIONI DELLA SOSPENSIONE OMOGENEIZZATA X VALUTARE LA PRESENZA PRESUNTIVA DI COLIFORMI.
E' UN TERRENO LIQUIDO SELETTIVO X COLIFORMI, UTILIZZATO NELLA COLIMETRIA.
LA SOLA PRODUZIONE DI GAS O LA SOLA TORBIDITA' NON SONO SUFFICIENTI X DICHIARARE LA POSITIVITA'.
SERVE SOLO X IDENTIFICARE COLIFORMI, NON TUTTI GLI ENTEROBATTERI
LA POSITIVITA' E' INDICATA SOLTANTO QUANDO SONO PRESENTI CONTEMPORANEAMENTE SIA LA TORBIDITA' DEL TERRENO SIA LA PRODUZIONE DI GAS NELLA CAMPANELLA.
SI EFFETTUANO DELLE
DILIUIZIONI
X RENDERE LA CARICA MICROBICA QUANTIFICABILE,
LO SCOPO E' RIDURRE LA CONCNTRAZIONE MICROBICA X PERMETTERE SUCCESSIVE ANALISI QUALITATIVE/QUANTITATIVE E X EVITARE SOVRACCARICO MICROBICO NEI TERRENI.
(ABBIAMO 9 PROVETTE CHE CONTENGONO IL BRODO VEDE BILE BRILLANTE, NELLE PRIME 3 PROVETTE METTO LA
SOSPENSIONE
"OMOGENEIZZATA" PRELEVATA DAL SACCHETTO, IN ALTRE 3 METTIAMO LA SOSPENSIONE OMOGENEIZZATA DILUITA 1:10, NELLE ALTRE 3 INSERIAMO AL SOLUZIONE DELLE PROVETTE PRECEDENTI (sospensione omogeneizzata diluita + brodo) DILUENDOLA NUOVAMENTE 1:10. LA PROVETTA VIENE INCUBATA A 30 GRADI X 28 ore)
RIASSUNTO PROCEDURA
:
PRELIEVO E SOTTOCAMBIAMENTO RAPPRESENTATIVO DEL RPODOTTO
OMOGENEIZZAZIONE DEL CAMPIONE IN UN DILUENTE NEUTRO X TRASFERIRE MICRORGANISMI IN SOSPENSIONE
PREPARAZIONE DI UNA SERIE DI DILUIZIONI X OTTENERE CONCENTRAZIONI ANALIZZABILI. SE IL CAMPIONE HA MOLTI MICROBI, BISOGNA DILUIRLI X POTERLI CONTARE.
INOCULO DI ALIQUOTE IN TERRENI SELETTIVI (x screening, vedere se nel campione sono presenti oppure no certi microrganismi) E IN TERRENI DI ARRICCHIMENTO (x aumentare il recupero di patogeni a bassa carica)
SE NECESSARIO, SEMINA SU TERRENI SOLIDI SELETTIVI/DIFFERENZIALI X ISOLARE COLONIE SOSPETTE
VALUTAZIONE PRESUNTIVA BASATA SU CARATTERISTICHE DI CRESCITA E TEST IOCHIMICI/DI CONFERMA SECONDO METODO UFFICIALE
CONFERME E INTERPRETAZIONE FINALE SECONDO PROCEDURE NORMATIVE (es. ISO/FDA, ecc)