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IDENTIFICAZIONE MICROBIOLOGICA MEDIANTE VITEK E MALDI-TOF - Coggle Diagram
IDENTIFICAZIONE MICROBIOLOGICA MEDIANTE VITEK E MALDI-TOF
MALDI-TOF
INTRO
IL MALDI-TOF È UNA SPETTROMETRIA DI MASSA CHE SERVE A IDENTIFICARE
OPPURE MICRORGANISMI (BATTERI, LIEVITI, FUNGHI) IN BASE ALLA LORO MASSA MOLECOLARE.
MOLECOLE BIOLOGICHE (COME PROTEINE, PEPTIDI, POLISACCARIDI, LIPIDI, ECC.)
METODO DI ESECUZIONE
4)
RILEVAZIONE E ANALISI DEI DATI
SI OTTIENE UNO SPETTRO DI MASSA, CIOÈ UN GRAFICO CON PICCHI CHE RAPPRESENTANO LE DIVERSE MOLECOLE PRESENTI NEL CAMPIONE.
NEL CASO DI IDENTIFICAZIONE BATTERICA O FUNGINA:
LO STRUMENTO CONFRONTA LO SPETTRO PROTEICO (PRINCIPALMENTE DELLE PROTEINE RIBOSOMIALI) CON UN DATABASE DI RIFERIMENTO
E IN POCHI SECONDI FORNISCE IL NOME PRECISO DEL MICRORGANISMO.
IL TEMPO IMPIEGATO DA CIASCUN IONE X ARRIVARE AL RIVELATORE (IL “TEMPO DI VOLO”) VIENE MISURATO.
DA QUESTO TEMPO SI CALCOLA IL RAPPORTO MASSA/CARICA (M/Z) DI CIASCUN IONE.
3)
ACCELERAZIONE E VOLO (TIME OF FLIGHT)
GLI IONI GENERATI VENGONO ACCELERATI IN UN CAMPO ELETTRICO,
MA QUELLI + LEGGERI VIAGGIANO + VELOCEMENTE,
QUELLI + PESANTI + LENTAMENTE.
GLI IONI PERCORRONO UN TUBO DI VOLO (FLIGHT TUBE) FINO A RAGGIUNGERE UN RIVELATORE.
2)
DESORBIMENTO E IONIZZAZIONE
DURANTE QUESTO PROCESSO, MOLTE MOLECOLE DEL CAMPIONE SI IONIZZANO (ACQUISISCONO UNA CARICA POSITIVA).
UN LASER COLPISCE LA SUPERFICIE DEL CAMPIONE,
L’ENERGIA DEL LASER VIENE ASSORBITA DALLA MATRICE,
CHE SI “VAPORIZZA” PORTANDO CON SÉ ANCHE LE MOLECOLE DEL CAMPIONE.
1)
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE
UNA PICCOLA QUANTITÀ DI QUESTA MISCELA VIENE DEPOSITATA SU UNA PIASTRA METALLICA E FATTA CRISTALLIZZARE.
SI MESCOLA IL CAMPIONE CON UNA MATRICE (UNA SOSTANZA CRISTALLINA ORGANICA COME L’ACIDO SINAPINICO, FERULICO, SUCCINICO O CAFFEICO):
LA MATRICE SERVE AD ASSORBIRE L’ENERGIA DEL LASER E A PROTEGGERE LE MOLECOLE BIOLOGICHE DALL’ESSERE DISTRUTTE.
SISTEMA VITEK
ALL’INTERNO DELLE CARD:
-LE CARD X L’ANTIBIOGRAMMA CONTENGONO DIVERSE CONCENTRAZIONI DI ANTIBIOTICI, PERMETTENDO DI VALUTARE LA CRESCITA BATTERICA IN PRESENZA DEI FARMACI E QUINDI DI DETERMINARE LA SENSIBILITÀ O LA RESISTENZA DEL MICRORGANISMO.
-I BATTERI METABOLIZZANO DIVERSI SUBSTRATI BIOCHIMICI, PRODUCENDO METABOLITI, RILEVATI OTTICAMENTE DAL SISTEMA, CHE LI UTILIZZA PER IDENTIFICARE LA SPECIE MICROBICA;
NELLA CASSETTA SI POSIZIONA:
LA PROVETTA CON LA SOSPENSIONE BATTERICA, ASSOCIATA ALLA CARD DI IDENTIFICAZIONE (ID);
NEL SUPPORTO ADIACENTE, UNA 2° PROVETTA VUOTA, DESTINATA ALLA CARD X L’ANTIBIOGRAMMA (AST).
• LO STRUMENTO ESEGUIRÀ AUTOMATICAMENTE LA DILUIZIONE DELLA SOSPENSIONE BATTERICA, OTTENENDO UN INOCULO STANDARDIZZATO E ADEGUATO PER LA CARD DI ANTIBIOGRAMMA.
ESISTONO DIVERSE TIPOLOGIE DI CARD VITEK, SPECIFICHE X PROGETTATE X BATTERI GRAM-POSITIVI, BATTERI GRAM-NEGATIVI, CAMPIONI URINARI.
PRIMA DI UTILIZZARE IL SISTEMA VITEK, IL MICRORGANISMO DI INTERESSE DEVE ESSERE:
ISOLATO
: OTTENUTO DA UN CAMPIONE CLINICO (SANGUE, URINA, TESSUTI, ETC.) E COLTIVATO SU TERRENI DI COLTURA APPROPRIATI FINO A OTTENERE COLTURE PURE;
INOCULATO
: SI PREPARA UNA SOSPENSIONE BATTERICA A DENSITÀ STANDARDIZZATA, IN MODO CHE LA QUANTITÀ DI BATTERI SIA UNIFORME E COMPARABILE TRA I TEST.
PREPARAZIONE DELLA SOSPENSIONE BATTERICA (FASI):
LA TORBIDITÀ DELLA SOSPENSIONE VIENE STANDARDIZZATA UTILIZZANDO UN DENSITOMETRO;
LA PROVETTA (CONTENENTE LA SOSPENSIONE BATTERICA STANDARDIZZATA) VIENE INSERITA NELLA CASSETTA DI CARICAMENTO DEL SISTEMA VITEK 2.
SI PRELEVANO LE COLONIE FRESCHE E BEN ISOLATE DAL TERRENO DI COLTURA MEDIANTE UN’ANSA STERILE E VENGONO SOSPESE IN 3,0 ML DI SOLUZIONE SALINA (NACCL 0,45-0,5%) ALL’INTERNO DI UNA PROVETTA DI PLASTICA TRASPARENTE.
IL SISTEMA VITEK È UN SISTEMA SEMI-AUTOMATIZZATO UTILIZZATO NEI LABORATORI DI MICROBIOLOGIA CLINICA X L’IDENTIFICAZIONE RAPIDA DI BATTERI E LIEVITI,
NONCHÉ X L’ESECUZIONE DI TEST DI SENSIBILITÀ AGLI ANTIBIOTICI (ANTIBIOGRAMMI), UTILE X GUIDARE UNA TERAPIA ANTIBIOTICA, MONITORARE E PREVENIRE LA RESISTENZA AGLI ANTIBIOTICI O SUPPORTARE LA RICERCA NELLO SVILUPPO DI NUOVI FARMACI ANTIBIOTICI.
• UNA VOLTA INOCULATE, LE CARD VENGONO SIGILLATE AUTOMATICAMENTE, IDENTIFICATE TRAMITE CODICE A BARRE E TRASFERITE NEL MODULO DI INCUBAZIONE E LETTURA.
• NEL MODULO, LE CARD VENGONO INCUBATE A TEMPERATURA CONTROLLATA (CIRCA 35–37 °C).
IL SISTEMA EFFETTUA LETTURE OTTICHE E/O FLUORESCENTI, X MONITORARE NEL TEMPO: LE VARIAZIONI DI TORBIDITÀ E DI COLORE PROVOCATE DALLA CRESCITA BATTERICA O DALL’ATTIVITÀ ENZIMATICA, NECESSARI ALL’IDENTIFICAZIONE E ALLA VALUTAZIONE DELLA SENSIBILITÀ AGLI ANTIBIOTICI.
IL SISTEMA VITEK2 ELABORA I RISULTATI ATTRAVERSO UN SOFTWARE INTEGRATO, CHE SI AVVALE DI UN AMPIO DATABASE DI RIFERIMENTO, X INTERPRETARLI E RENDERLI DISPONIBILI SU UNA PIATTAFORMA WEB COLLEGATA ALLO STRUMENTO.
L’ANTIBIOGRAMMA, DETERMINA LA SENSIBILITÀ O LA RESISTENZA DEI MICRORGANISMI AI DIVERSI ANTIBIOTICI.
IL TEST PERMETTE DI DETERMINARE LA CONCENTRAZIONE MINIMA INIBENTE (MIC), OVVERO LA + CONCENTRAZIONE BASSA DI UN ANTIBIOTICO (ΜG/ML) IN GRADO DI INIBIRE LA CRESCITA VISIBILMENTE LA CRESCITA DEL MICRORGANISMO IN ESAME.
L’INTERPRETAZIONE DEI VALORI OTTENUTI AVVIENE SECONDO I CRITERI STABILITI DAI PRINCIPALI COMITATI INTERNAZIONALI DI RIFERIMENTO, QUALI:
EUCAST (EUROPEAN COMMITTEE ON ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY TESTING) O CLSI (CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE), CHE DEFINISCONO LE SOGLIE DI SENSIBILITÀ PER CIASCUN ANTIBIOTICO E MICRORGANISMO.