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HPLC - Coggle Diagram
HPLC
METODO DI ESECUZIONE
IL CAMPIONE SI INSERISCE NELL'AUTOCAMPIONATORE (PARTE CENTRALE) CON LE VIALS, CHE PRESENTANO UN RIDUTTORE DI VOLUME DENTRO,
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OLTRE AL CAMPIONE INSERIAMO ANCHE UN CONTROLLO (CHE HA UNA QUANTITÀ NOTA DELLE SOSTANZE) E IL CALIBRATORE.
RISULTATO: LE SOSTANZE ESCONO DALLA COLONNA IN TEMPI DIVERSI, DETTI TEMPI DI RITENZIONE E IL DETECTOR REGISTRA UN PICCO.
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È IMPORTANTE CHE NON CI SIA ARIA ALL'INTERNO DEL SISTEMA POICHÉ CIÒ MODIFICHEREBBE LA PRESSIONE,
X QUESTO PRIMA DI INIZIARE IL DOSAGGIO SI APRE UNA VALVOLINA CHE PERMETTE DI PESCARE LA FASE MOBILE E DI ELIMINARE LE BOLLE ALL'ESTERNO DELL'HPLC.
LE MOLECOLE DELLA MISCELA DA ANALIZZARE INTERAGISCONO DIVERSAMENTE CON LA FASE STAZIONARIA E LA FASE MOBILE,
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POI SUCCESSIVAMENTE, UNA VOLTA INIZIATA L'ANALISI TUTTI I REAGENTI PASSERANNO IN UN DEGASSIFICATORE PER ELIMINARE EVENTUALI BOLLE.
SI BASA SU 2 FASI:
- UNA FASE MOBILE (LIQUIDA): UNA MISCELA DI SOLVENTI ORGANICI COME METANOLO O ACIDO NITRILE O TAMPONI E ACQUA (UTILIZZATA PER IL LAVAGGIO) POMPATI AD ALTA PRESSIONE DA 2 O 4 POMPE, POSTE NELLA PARTE SUPERIORE DELLO STRUMENTO.
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- UNA FASE STAZIONARIA (COLONNA): NELLA PARTE INFERIORE, COSTITUITA DA UNA COLONNA IN ACCIAIO CHE INTERAGISCE CON LE MOLECOLE, DIVERSA X OGNI METODICA DI FARMACO, CHE DEVE ESSERE LAVATA ALLA FINE DEL PROCESSO, CON ACQUA E ACIDO NITRILE, POICHÉ IL TAMPONE UTILIZZATO POTREBBE CRISTALLIZZARSI NELLA COLONNA.
CONCLUSIONE
I VARI PICCHI VENGONO IDENTIFICATI GRAZIE ALLO SPETTRO, CHE È DIVERSO PER CIASCUNA SOSTANZA,
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LA CONCENTRAZIONE È DATA INVECE DALLA CURVA DI CALIBRAZIONE, GENERATA DALLE VARIE CONCENTRAZIONI PRESENTI NEL CALIBRATORE
E A PARTIRE DA QUESTA SI RICAVA IL VALORE EFFETTIVO DI QUELLA DETERMINATA SOSTANZA PRESENTE NEI CAMPIONI.
ALLA FINE SI OTTIENE UN CROMATOGRAMMA CON DEI VARI PICCHI CHE INDICANO A CHE MINUTO ESCONO LE VARIE SOSTANZE DALLA COLONNA (TEMPO DI RITENZIONE O RILASCIO, RT),
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INTRO
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CROMATOGRAFIA LIQUIDA AD ALTA PRESTAZIONE, TECNICA ANALITICA USATA X SEPARARE, IDENTIFICARE E QUANTIFICARE SOSTANZE CHIMICHE IN UNA MISCELA.