Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

CÁC KỸ THUẬT THEO CẤP ĐỘ PHÂN TỬ - Coggle Diagram

- - - - Nhuộm băng NST
        
        Độ phân giải băng 400/ 550 /850 băng
        =Tổn băng đậm + nhạt của bộ 46 NST
        
        Kí hiệu băng
        p/q+ số băng
        
        5 kiểu băng
        
        Băng Q :
        
        Dễ nhuộm nhưng băng dễ bị hủy khi phân tích dưới KHV huỳnh quang nên không lưu lam
        
        -Băng Q nhuộm bằng quinacrine và quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang.
        -Các băng còn lại: đều nhuộm bằng giemsa và quan sát dưới kính hiển vi quang học.
        
        Băng G:
        
        dùng nhiều nhất vì có thể lưu lam được lâu.
        
        Xử lí với trypsin và nhuộm Giemsa
      - Yếu tố cần để cấy
        
        Bệnh phẩm
        
        tế bào sống và phải phân bào được. (để dừng ở kỳ giữa của phân bào)
        
        cấy TB càng sớm càng tốt, tốt nhất là 1-2 giờ sau khi lấy mẫu. vì ngoài cơ thể tế bào ung thư sẽ chết trước tb bình thường (=>âm giả).
        
        Chất kích thích nuôi cấy
        
        Lympho T:
        (bệnh di truyền)
        
        Chất chuyển dạng tế bào PHA-M
        lympho T trưởng thành => lympho T non
        (vì Máu chứa 70% là lympho T)
        
        Lympho B trưởng thành
        (bệnh CLL -bc mạn lymphoB)
        
        Chất kích thích phân bào
        
        chỉ dùng với LB trưởng thành, LB non không cần
        
        Rối loạn TB dòng tuỷ
        
        Không có chất kích thích đặc hiệu
        
        => Lấy mẫu TB non rồi cho cytokine để phát triển
        
        TB ối
        
        Không có chất kích thích đặc hiệu
      - Dung dịch nhược trương KCL phá vỡ màng TB
        Cố định bằng dung dịch carnoy
        Phân tích 20-30 TB
      - 3.1) Phân tích dựa vào
        
        Thay đổi về kích thước của nst (dài – ngắn).
        
        Thay đổi về băng của NST.
      - Ưu khuyết
        
        Phát hiện nhiều bất thường NST
        -Lâu, tốn công, âm giả
  - - - Nguyên tắc
        
        Biến tính chuỗi đôi thành chuỗi đơn.
        
        Lai hoá mẫu dò probe đặc hiệu đoạn DNA đã được gắn huỳnh quang vào
        
        Loại Probe
        
        probe vùng tâm
        
        alpha satellite
        
        định số lượng NST
        
        chẩn đoán Trisomy hay là Monosomy, cả trên Metaphase FISH và Interphase FISH.
        
        probe vùng nhánh
        
        không kết luận được là Trisomy,
        mà ứng dụng chẩn đoán khuếch đại gene trong K
        
        probe cả tâm và nhánh
        
        BAC probe
        
        =>Quan sát dưới kính
      - Ứng dụng
        
        GEN HER2 TRONG K VÚ
        
        probe gắn tâm: số lượngNST 17
        probe gắn nhánh: có khuếch đại HER 2
        
        tính ra tỷ lệ.
        Kết luận tăng biểu hiện HER 2 - dùng thuốc nhắm trúng đích
        
        Fusion gene trong K TLT
        
        probe gắn fushion gen (đoạn nối ghép do mất đoạn)
        
        mất đoạn trong HC DIGEORGE
        
        probe phủ gene TBX
        
        Lệch bội trước sinh
        
        probe phủ tâm và nhánh
        
        Đa u tuỷ, lymphoma, bạch cầu cấp
        
        probe phủ gene TP53 ở 17p1
        
        CHUYỂN VỊ t(9;22) TRONG CML
        
        probe phủ gene BCR và ABL tại NST 22
        
        UNG THƯ, HUYẾT HỌC
      - Ưu khuyết
        
        Nhanh, chính xác hơn NST đồ
        Nhược điểm: chỉ phát hiện được đúng vùng gen phủ probe
        => thay vào đó dùng CGH và array CGH
    - - Nguyên tắc
        
        Sử dụng DNA của mẫu U, được lai hóa cạnh tranh với DNA bình thường (chứng). gắn huỳnh quang
        
         Xác định được vùng bình thường, vùng khuếch đại, vùng mất đoạn.
        
        Nhưng không biết cụ thể vùng này gen gì bất thường => dùng Array CGH.
    - - Nguyên tắc:
        
        Tương tự CGH
        
        Sử dụng DNA của mẫu U, được lai hóa cạnh tranh với DNA bình thường (chứng). gắn huỳnh quang
        
        Cho lên các giếng, mỗi giếng chứa một BAC probe khác nhau.
        
        Khác ở chỗ nhiều giếng và nhiêu BAC probe
    - - -1 :mất 1 alen : Heter
        -2 :mất 2 alen: Homo
        +1 : 3 copy. trisomy
        +2: 4 copy. tetrasomy
      - Định vị được vị trí gen / Vị trí NST bất thường.
    - - Ưu: phát hiện đột biển 1 điểm - tới vùng rộng
        -Sử dụng nhiều probe
        (Fish dùng 1 probe cần khu trú chẩn đoán)
      - Khuyết: - Không phát hiện được chuyển vị cân bằng
        
        Chi phí cao hơn
- - - - phản ứng PCR đơn thuần Polymerase Chain Reaction. (có sẵn bộ KIT xét nghiệm)
        
        ASO -PCR: Phát hiện đột biến điểm từ trước
        Có mồi đặc hiệu hơn PCR đơn thuần
        
        đột biến gen JAK2 huyết học
        G=>T
        
        => đột biến gen giữa các chủng tộc khác nhau=> cần dùng bộ KIT phù hợp chủng tộc
    - - PCR kèm giải trình tự DNA
        
        PCR
        
        PCR đơn thuần
        =Khuếch đại gen
        
        Nguyên tắc:
        -Nhiều lần Biến tính bằng nhiệt tách 2 mạch
        -Dùng cặp mồi bắt màu hồi tính lại
        
        Nhược điểm: không trung thực có thể sai sót rất là nhiều
        trong ống nghiệm thì không có enzyme sửa sai
        
        Giải trình tự DNA
        một sóng tương ứng với một nucleotide
        =>So sánh với ngân hàng gen
        
        Giair trình tự thế hệ mới:
        Giair loạt gen cùng lúc
        
        Khi giải trình tự gen phát hiện nhiều biến thể bất thường, phải so sánh với đúng chủng tộc để xác định có gây bệnh không