Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
LP 3: microscopia în contrast de fază și microscopia de fluorescență,…
LP 3: microscopia în contrast de fază și microscopia de fluorescență
microscopia în contrast de fază
țesuturile necolorate :arrow_right:optic neomogene :arrow_right:au indici de refracție diferiți, lumina se refractă diferit în zonele substanței :arrow_right:unele părți apar mai deschise, altele mai întunecate (chiar dacă nu au fost colorate)
acest lucru depinde și de densitate și de compoziția substanței
DIFERENȚĂ DE FAZĂ
=diferență de drum optic
prea mici, nu se văd cu ochiul liber
sunt amplificate cu ajutorul
plăcii de fază
microscopul cu contrast de fază transformă aceste diferențe invizibile de fază în diferențe vizibile de intensitate (luminozitate)
nu trebuie să le colorăm celulele
SE POT STUDIA CELULE VII
placa de fază este un disc din sticlă optică specific
cum funcționează mai exact?
razele de lumina de la sursă ajung la preparat :arrow_right: obiectiv :arrow_right: placa de fază cu șanț inelar
raza nerefractată trece prin inel
placa de fază o „întârzie” cu un sfert de lungime de undă
raza refractată nu trece prin inel
la formraea imaginii se realizează interferența razelor normale și cele defazate
mărire a contrastului
:arrow_right: halou ce crește contrastul
putem să le vedem detalii invizibile la microscop optic simplu
trusă cu condensor, obiectiv, ocular, chei speciale
este folosită la
studiul celulei vii
observare nucleului
distribuția organitelor
modifiări din diviziunea celulei
mișcări celulare
observarea preparatelor transparente (care nu absorb lumina)
fertilizare in vitro
spermogramă
microscopia de fluorescență
noțiuni generale
Absorb → moleculele devin excitate→ revin la starea fundamentală→ Emite lumină (pierderea energiei)
substanțele cu flourescența puternică=
FLUOROCROMI
iradierea cu lumină UV :arrow_right: excitarea fluorocromilor :arrow_right: fluorescența zonelor cu fluorocromi
are ca sursă o lampă cu vapori de mercur, ce emite radiații ultraviolete
se așează filtre de excitație
albastru-violet
opresc radiațiile sursei cu excepția celor care excită fluorocromul
radiația trece prin condensor :arrow_right:obiectiv :arrow_right:lama cu preparat :arrow_right: filtre de baraj (opresc lumina de la sursă, permit recerea luminii de la fluorocrom)
sunt din sticlă cuarț
zonele fluorescente apar luminate pe fond întunecat
preparatele sunt puse pe lame de sticlă nefluorescente/ulei nefluorescent (imersie)
se pot folosi la preparate netransparente și cele transparente
când se folosește?
observarea preparatelor colorate vital
observarea lizozomilor cu coloranți fluorescenți
studiul cromozomilor
studii imunologice
substanțelor chimice din interiorul celulelor
histochimie
studiul substanțelor chimice în țesuturi
:warning:
razele UV produc leziuni retiniene f grave
se privește doar cu filtre de baraj
la pornirea lămpii:15 min, după oprire 2 ore (lăsat de răcit)
se pot efectua:
prin transmisie
preparate transparente
prin reflexie
iluminare de sus
preparatele sunt tratate cu flourocromi
zonele de interes devin fluorescente când sunt iradiate cu lumina UV
!faza luminii înseamnă poziția exactă a unei unde la un anumit moment
când lumina trece printr-un material viteza ei se schimbă în fcț. de ind. de refr.
într-un mediu cu indice mai mare :arrow_right_hook: lumina se deplasează mai încet
o să fie un pic în urmă
decalarea în timp se numește diferență de fază
într-un mediu cu indice mai mic :arrow_right: lumina merge mai repede
