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DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES MONOGÉNICAS https://youtu.be/sk2Pwa6MwI4?si=Bc…
DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES MONOGÉNICAS
https://youtu.be/sk2Pwa6MwI4?si=BcwF1LpSDqvgpIzX
MÉTODOS DE EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DEL ADN Y ARN
Uso de columnas que capturan el ácido nucleico de interés (a través de la sangre).
MÉTODOS PARA DETECTAR MUTACIONES EN ADN
SECUENCIACIÓN DEL ADN
SECUENCIACIÓN SANGER
Determinar el orden de las bases nitrogenadas a lo largo de un segmento de ADN. La secuencia de fragmentos del gen se compara con la secuencia normal.
SECUENCIACIÓN DE NUEVA GENERACIÓN
Producción de grandes volúmenes de datos de secuencias y con una alta flexibilidad.
ANÁLISIS DE CONFORMACIÓN DE CADENAS SENCILLAS DE ADN (SSCP)
Unas 200 pares de bases flanqueantes del gen se amplifican por PCR a partir de ADN de individuos sanos.
ELECTROFORESIS EN GEL DE GRADIENTE DESNATURALIZANTE (DGGE)
Los productos intactos de la PCR de exones u otras regiones del gen se someten a urea o formamida.
ANÁLISIS DE HETERODÚPLEX
Las muestras de ADN del paciente y del control sano se combinan y se amplifican por PCR. Si hay alguna diferencia en la secuencia de nucleótidos, se formará un heterodúplex.
ANÁLISIS POR ROTURA QUÍMICA DE BASES DESAPAREADAS
Las muestras de ADN de pacientes y controles se amplifican por PCR. La rotura de productos indica diferencia e un nucleótido entre las muestras de ADN.
MICROMATRICES DE OLIGONUCLEÓTIDOS
Permiten el análisis de más de 100 mil biomoléculas en volúmenes de reacción muy pequeños.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DESNATURALIZANTE DE ALTO RENDIMIENTO (DHPLC)
Método eficiente de detección de mutaciones de un solo o pocos nucleótidos. Los fragmentos de ADN se separan durante su tránsito por un gradiente en una columna. En el ADN amplificado de cadena doble, los nucleótidos que se asocian erróneamente se hacen evidentes.
ANÁLISIS MEDIANTE RFLP
Tras una amplificación por PCR de la región de interés del gen, se somete al producto a la digestión con una enzima de corte específico.
DETECCIÓN Y ANÁLISIS DE MUTACIONES EN ARN
TRANSCRIPCIÓN INVERSA SEGUIDA DE AMPLIFICACIÓN POR PCR (RT-PCR)
Los productos de la reacción son analizados mediante secuenciación de ADN. Se pueden distinguir alteraciones en el procesamiento de ARN durante su maduración, presencia de tránscritos alternativo del gen.
SISTEMA DE MINIGENES
Vector plasmídico parte de un gen con algunos de sus exones e intrones.
ELECTROFORESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Permite evaluar su integridad y estimar su concentración mediante un análisis comparativo con patrones de concentración conocida.
AMPLIFICACIÓN DE SONDAS MÚLTIPLES DEPENDIENTE DE LIGACIÓN (MLPA)
Picos de fluorescencia en un electroferograma se compara con una muestra de control.
REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA
Partiendo de una cantidad pequeña de ADN genómico, se puede amplificar distintas partes de genes.
PCR CONVENCIONAL
Se mide la intensidad relativa de la banda del producto de PCR del gen de interés y de un gen constitutivo.
PCR EN TIEMPO REAL
La detección de las copias del producto de PCR se realiza al mismo tiempo que sucede la amplificación, mediante intercalados en el producto de PCR. La temperatura de alineación y extensión es la misma.
PCR CUANTITATIVA
Permite reportar en números absolutos la cantidad de un microorganismo o del ARNm de un gen en una muestra-
PCR MÚLTIPLE O MULTIPLEX
Se reliza la amplificación de más de un fragmento de ADN en una sola reacción de PCR con 2 o más juegos de primers (cada juego para un gen en particular).
