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EPATOLOGIA MOLECOLARE - Coggle Diagram
EPATOLOGIA MOLECOLARE
PCR
LA PRIMA È LA DENATURAZIONE, IN CUI IL DNA VIENE PORTATO A UNA TEMPERATURA COMPRESA TRA 94 E 98 °C: I LEGAMI IDROGENO CHE TENGONO UNITI I DUE FILAMENTI SI ROMPONO E LE CATENE SI SEPARANO, RENDENDO DISPONIBILI LE SEQUENZE COMPLEMENTARI.
SEGUE LA FASE DI ANNEALING, A UNA TEMPERATURA PIÙ BASSA, GENERALMENTE TRA 50 E 65 °C, IN CUI I PRIMER SI APPAIANO ALLE SEQUENZE BERSAGLIO DEL DNA STAMPO.
L’IDEA ALLA BASE DELLA PCR È RIPRODURRE IN LABORATORIO, IN MODO ARTIFICIALE E CICLICO, CIÒ CHE AVVIENE NATURALMENTE NELLA CELLULA DURANTE LA REPLICAZIONE DEL DNA.
INFINE AVVIENE L’ELONGAZIONE, A CIRCA 72 °C, QUANDO LA POLIMERASI SINTETIZZA NUOVI FILAMENTI APPAIANDO NUCLEOTIDI COMPLEMENTARI A PARTIRE DAI PRIMER.
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IN POCHE ORE È POSSIBILE OTTENERE MILIONI O MILIARDI DI COPIE IDENTICHE DI
QUEL FRAMMENTO, RENDENDOLO FACILMENTE ANALIZZABILE O UTILIZZABILE IN ALTRI ESPERIMENTI.
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LA PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION, REAZIONE A CATENA DELLA POLIMERASI) È UNA TECNICA DI BIOLOGIA MOLECOLARE CHE CONSENTE DI AMPLIFICARE IN VITRO UNA SEQUENZA SPECIFICA DI DNA,
ANCHE QUANDO È PRESENTE IN QUANTITÀ ESTREMAMENTE RIDOTTE (AD ESEMPIO POCHE COPIE IN UN CAMPIONE BIOLOGICO).
IL FUNZIONAMENTO DELLA PCR SI BASA SU UNA SUCCESSIONE DI VARIAZIONI CONTROLLATE DI TEMPERATURA ALL’INTERNO DI UN TERMOCICLATORE.
QUESTE TRE FASI VENGONO RIPETUTE IN MANIERA CICLICA, SOLITAMENTE PER 20–40 VOLTE.
A OGNI CICLO LA QUANTITÀ DI DNA BERSAGLIO RADDOPPIA TEORICAMENTE, GENERANDO UNA CRESCITA ESPONENZIALE.
DOPO UNA TRENTINA DI CICLI SI PUÒ OTTENERE PIÙ DI UN MILIARDO DI COPIE DELLA SEQUENZA INIZIALE, ANCHE PARTENDO DA UNA SOLA MOLECOLA.
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