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EPATOLOGIA MOLECOLARE 4 - Coggle Diagram
EPATOLOGIA MOLECOLARE 4
SEPARAZIONE LINFOCITARIA MEDIANTE GRADIENTE
QUANDO IL CAMPIONE VIENE CENTRIFUGATO, LE CELLULE PIÙ DENSE, COME I GLOBULI ROSSI E ALCUNI GRANULOCITI, MIGRANO FINO AL FONDO DEL TUBO,
MENTRE LE CELLULE MENO DENSE, COME I LINFOCITI, SI FERMANO A UN LIVELLO INTERMEDIO, FORMANDO UNO STRATO DISTINTO CHE PUÒ ESSERE PRELEVATO SEPARATAMENTE.
IL SANGUE VIENE STRATIFICATO SU UN LIQUIDO SPECIALE CON DENSITÀ CALIBRATA, SPESSO CHIAMATO GRADIENTE DI DENSITÀ.
LA QUALITÀ DELLA SEPARAZIONE DIPENDE DA VARI FATTORI, COME LA CORRETTA PREPARAZIONE DEL GRADIENTE, LA CENTRIFUGAZIONE E IL PRELIEVO ATTENTO DELLO STRATO INTERMEDIO, EVITANDO DI CONTAMINARE IL CAMPIONE CON CELLULE PIÙ DENSE O RESIDUI DI PLASMA.
IL PRINCIPIO SU CUI SI BASA È LA DIFFERENZA DI DENSITÀ TRA I VARI TIPI DI CELLULE.
QUESTO STRATO INTERMEDIO, CHIAMATO INTERFACCIA DEL GRADIENTE, CONTIENE QUINDI LE CELLULE MONONUCLEATE DESIDERATE, RELATIVAMENTE PURE E VITALI.
LA SEPARAZIONE LINFOCITARIA MEDIANTE GRADIENTE È UNA TECNICA UTILIZZATA PER ISOLARE LE CELLULE MONONUCLEATE DEL SANGUE,
IN PARTICOLARE I LINFOCITI E I MONOCITI, DAL RESTO DELLE CELLULE PRESENTI, COME I GLOBULI ROSSI E I GRANULOCITI.
QUESTA TECNICA È MOLTO UTILE PERCHÉ PERMETTE DI OTTENERE LINFOCITI DA UTILIZZARE IN STUDI IMMUNOLOGICI, PER COLTURE CELLULARI O PER ESTRAZIONI DI DNA/RNA.
PURIFICAZIONE DEI PRODOTTI DI PCR MEDIANTE KIT COMMERCIALI
QUESTI KIT SONO AMPIAMENTE UTILIZZATI IN LABORATORI DI BIOLOGIA MOLECOLARE PER PREPARARE I CAMPIONI DESTINATI A SEQUENZIAMENTO, CLONAGGIO O ALTRE APPLICAZIONI ANALITICHE.
CONSIDERAZIONI PRATICHE
-QUANTITÀ DI DNA: ASSICURARSI CHE LA QUANTITÀ DI DNA SIA ADEGUATA PER LE APPLICAZIONI SUCCESSIVE, SEGUENDO LE LINEE GUIDA DEL KIT SPECIFICO.
-CONTROLLO DELLA QUALITÀ: È ESSENZIALE VERIFICARE CHE IL PRODOTTO DI PCR SIA UNA SINGOLA BANDA NETTA E SPECIFICA, PER GARANTIRE UNA PURIFICAZIONE EFFICACE.
-CONSERVAZIONE: CONSERVARE I CAMPIONI PURIFICATI A -20°C PER MANTENERNE L'INTEGRITÀ.
PRINCIPIO DI FUNZIONAMENTO
DOPO IL LEGAME, IL DNA VIENE LAVATO PER RIMUOVERE LE IMPURITÀ E SUCCESSIVAMENTE ELUÌTO IN UN TAMPONE A BASSA SALINITÀ O IN ACQUA,
OTTENENDO COSÌ UN PRODOTTO DI DNA PURIFICATO.
LA MAGGIOR PARTE DI QUESTI KIT SI BASA SULLA TECNOLOGIA DELLA MEMBRANA DI SILICE, CHE SFRUTTA LA CAPACITÀ DEL DNA DI LEGARSI A QUESTA MEMBRANA IN PRESENZA DI ALTE CONCENTRAZIONI SALINE.
VANTAGGI PRINCIPALI
-VERSATILITÀ: COMPATIBILITÀ CON UNA VASTA GAMMA DI APPLICAZIONI DOWNSTREAM, TRA CUI SEQUENZIAMENTO, CLONAGGIO E TRASFEZIONE.
-ALTA RESA: RECUPERO EFFICIENTE DEL DNA AMPLIFICATO.
-ELEVATA PUREZZA: RIMOZIONE EFFICACE DI CONTAMINANTI CHE POTREBBERO INTERFERIRE CON LE ANALISI SUCCESSIVE.
-FACILITÀ D'USO: PROCEDURE STANDARDIZZATE CHE RIDUCONO LA VARIABILITÀ TRA ESPERIMENTI.
LA PURIFICAZIONE DEI PRODOTTI DI PCR MEDIANTE KIT COMMERCIALI È UNA TECNICA FONDAMENTALE PER OTTENERE DNA DI ALTA QUALITÀ,
PRIVO DI CONTAMINANTI COME PRIMER NON UTILIZZATI, NUCLEOTIDI LIBERI, SALI E ALTRE IMPURITÀ.
IN SINTESI, L'USO DI KIT COMMERCIALI PER LA PURIFICAZIONE DEI PRODOTTI DI PCR RAPPRESENTA UNA SOLUZIONE AFFIDABILE E STANDARDIZZATA PER OTTENERE DNA DI ALTA QUALITÀ,
PRONTO PER ESSERE UTILIZZATO IN UNA VARIETÀ DI APPLICAZIONI ANALITICHE.