Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Diagnóstico Molecular, abceso - Coggle Diagram
Diagnóstico Molecular
DIAGNÓSTICO BASADO EN EL FENOTIPO
Métodos diferenciales y selectivos
SELECTIVOS
Solo crecen ciertos MO
Agar de Sabouraud-Cm
Hongos dermatofitos
DIFERENCIAL
prueba fenotípica que diferencia especies
Agar MacConkey
gram -
Slectivo para Gram- y diferencial para Lac+
Staph. Aureus
medio de Chapman
Medio de Tiosulfato-Citrato-Sales biliares-Sacarosa
Vibrio Cholerae
Agar de Sangre
Streptococcus
Tinciones y determinaciones bioquímicas
tinciones diferenciales
bacterias y hongos al microscopio
Tinción de Ziehl-Neelsen para micobacterias en esputo
test bioquímicos
test API
para estreptococos
test BioLog
placas 96 pocillos
600 pruebas a la vez
lo mismo pero en masa
Test Catalasa
diferenciar Staph + y Strep -
burbujas H2O2
h2 + o2
Coagulasa
coagula plasma
positivo
Staph aureus
Oxidasa
presencia de citocromo C
tira
azul
positivo
Indol
a partir de trp
reactivo de Kovac
si forma capa rosada es +
ureasa
cambio amarillo - rosa
bajo pH
urea- (hidrólisis)-amoniaco
Citrato
bacterias que hacen puentes de C
+
cambio de verde a azul
DETERMINACIÓN POR ESPECTOFOTOMETRÍA DE MASAS
separa moléculas según
tamaño
carga
MALDI-TOF
cultivamos especimen
añadimos muestra a matriz
ionización por láser u otro
se cargan moléculas en tubo de vacio
vuelan por el detector
método de referencia para identificar cepas
Cada bacteria tiene un patrón de todas las moléculas que contienen en su lisado
necesario
espectrómetro de masas
muestra crecida en placa
tarda tiempo
DIAGNÓSTICO BASADO EN MÉTODOS INMUNOLÓGICOS
métodos inmunológicos
INDIRECTO
tipos
inmunofluorescencia
Ac conjugado con fluorescencia
detecta Ag problema
Aglutinación
Ac en capa de latex
forma red de agregados visible al unirse al Ag
Inmunocromatografía
tira de nitrocelulosa
Ac conjugado que dan señal
unión a Ac en línea control
siempre se une
línea específica
Ac +Ac conjugado +Ag
Inmunoensayo (ELISA)
Ag en superficie
unión Ac con fluoróforo
según color, más o menos concentración
estudio de las seroconversiones
cambio en la concentración y avidez de Ig
Nos indica en que fase de la infección se está
temprana: Ig M
tardía: Ig G
diagnóstico diferencial para la toxoplasmosis
en embarazadas
Mide nuestra respuesta inmune
Anticuerpo primerio al patógeno
monoclonal
policlonal
poco especifico
Anticuerpo secundario marcado
Señal
Anti-AC
requiere una superficie
DIRECTO
Ac conjugado que se une al patógeno
Señal
no requiere una superficie
requiere mucha cantidad de Ag
ANÁLISIS POR AMPLIFICACIÓN GENÉTICA
PCR
genes patógenos o de resistencia
secuenciación posterior
permite analizar variantes
Secuenciación Masiva
Sanger
NGS (ilumina/ ion torrent)
PacBio/Nanopore
detecta genes de resistencia y factores de virulencia
DIAGNÓSTICO DE LAS RESISTENCIAS A LOS ANTIBIÓTICOS
Objetivo
informar cuanto antes de opciones terapéuticas
mediante métodos fenotípicos
Problema: crecimiento lento
otras opciones
Métodos de base molecular
no siempre son fiables
Espectofotometría de masas
Si hay pp que dan resistencia, el patrón cambiará
No detecta bombas de flujo o mut. puntuales
MÉTODOS BASADOS EN DILUCIÓN
CMI
concentración mínima inhibitoria
menor concentración de antimicrobiano que evita el crecimiento
que no crezca no significa que esté muerta
dilución seriada
estándares de McFarland
Cultivo en Müeller-Hilton
CMB
concentración mínima bactericida
menor concentración de Ab para matar
CMI=CMB: bactericida
CMI < CMB: bacteriostático
MÉTODOS BASADOS EN LA DIFUSIÓN
Antibiograma
Halo de Inhibición
si hay colonias dentro: resistencias
más grande-más sensible
Podemos ver varios Ab a la vez
3 fenómenos
Efecto Paradójico de Eagle
Disminuye la muerte bacteriana por exceso de antibiótico
Persisters en standby
Persistencia
Resistencia de unas pocas bacterias de una población a la acción bactericida de un Ab
Tolerancia
Disminución o desaparición de la capacidad de matar de un Ab bactericida
MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DIRECTA
para beta-lactamasas
hidrólisis de nitrocefina
medios cromogénicos
sofisticados
MÉTODOS AUTOMATIZADOS DE ANÁLISIS
un robot lleva a cabo cada proceso
abceso
Siembra
MacConkey
---1 día ---
¿Staph aureus?
Catalasa y coagulasa
Agar de Sangre
B- hemólisis
Chapman
colonias amarillas
frotis y tinción gram
Cocos gram + en racimos
¿Staphilocuccus?