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MICROBIOLOGIA AMBIENTALE 1 - Coggle Diagram
MICROBIOLOGIA AMBIENTALE 1
ISOLAMENTO DEI MICRORGANISMI:
COL CAMPIONAMENTO PASSIVO, SFRUTTO LA PROPRIETÀ DI SEDIMENTAZIONE DEI GERMI IN BASE AL LORO PESO.
I CAMPIONAMENTI VENGONO FATTI ATTORNO AL LETTO OPERATORIO.
QUESTO METODO DI CAMPIONAMENTO È DETTO “ATTIVO” MA SI PUÒ FARE ANCHE IN MANIERA “PASSIVA”:
QUESTO CAMPIONAMENTO CONSISTE NELL’ESPOSIZIONE DELLE
PIASTRE
AI 4 ANGOLI DELLA SALA OPERATORIA AD UN METRO DA TERRA, AD UN METRO DAI MURI, AD UN METRO DAL LETTINO PER UN’ORA.
LE PIASTRE SU CUI ARRIVA L’ARIA VENGONO POI INCUBATE ED ANALIZZATE.
GENERALMENTE NON SI USA UN TERRENO SELETTIVO.
IL CAMPIONAMENTO DEI MICROORGANISMI AMBIENTALI VIENE FATTO UTILIZZANDO IL CAMPIONATORE SAS (SURFACE AIR SYSTEM).
IL
SAS
ASPIRA L’ARIA E LA IMPATTA SUL TERRENO. SULLA TESTATA DEL SAS CI SONO 180 FORELLINI.
IL CAMPIONAMENTO DI MICROORGANISMI AMBIENTALI PUÒ ESSERE FATTO SIA SULL’ARIA CHE SU SUPERFICI, ATTREZZATURE ED ALIMENTI.
ALLA FINE SI CONTANO LE COLONIE:
IN BASE ALLE COLONIE CHE CRESCONO, ESSE VENGONO RAPPORTATE AI DECIMETRI QUADRATI DELLA PIASTRA.
I PRELIEVI IN GENERE VENGONO FATTI PRIMA DELL’INTERVENTO, DURANTE (PER CAPIRE COSA PUÒ COMPORTARE LA MOVIMENTAZIONE DELL’ARIA) E A FINE INTERVENTO.
VENGONO GENERALMENTE ASPIRATI 500L DI ARIA;
180L AL MINUTO PER 3 MINUTI.
PER LE SUPERFICI VENGONO UTILIZZATE LE
SLIDES
:
DI SLIDES CE NE SONO DI DIVERSI TIPI E HANNO 2 TERRENI:
UNO È IL PCA (PLATE COUNT AGAR) CHE SERVE SOLO PER LA QUANTIFICAZIONE DEI BATTERI.
GLI ALTRI TERRENI (CHE SONO 5 IN TUTTO) POSSONO ESSERE SPECIFICI AD ESEMPIO PER STAFILOCOCCO, PSEUDOMONAS, ENTEROBATTERI.
IN QUESTO MODO SI AVRANNO DELLE COLONIE PURE.
SI APPOGGIANO SULLA SUPERFICIE PER \10 SECONDI FACENDO UNA LEGGERA PRESSIONE,
SIA DA UN LATO CHE DALL’ALTRO (E SI FANNO IN SALE OPERATORIE E SALE DEGENZE).
ESISTE ANCHE LA “COUNT SLIDE” CHE È SOLO PCA.
SE SI INTENDE ISOLARE UN BATTERIO BISOGNA PRELEVARE UNA PICCOLA ANSATA DI UNA COLONIA ISOLATA CRESCIUTA IN UN TERRENO E SEMINARLA SU UN ALTRO TERRENO,
INSERIRLA NUOVAMENTE NELL’INCUBATORE E ATTENDERE NUOVAMENTE LA CRESCITA.
IDENTIFICAZIONE:
SI UTILIZZANO DUE TIPI DI CARD PER OGNI CAMPIONE:
QUELLA PER L’IDENTIFICAZIONE BATTERICA CONTIENE DEI SUBSTRATI BIOCHIMICI IN FORMA DISIDRATATA,
L’ALTRA CONTIENE UN POZZETTO DI CONTROLLO, CONTENENTE TERRENO DI COLTURA MICROBIOLOGICO,
MENTRE I RESTANTI MICROPOZZETTI CONTENGONO QUANTITÀ STANDARD DI ANTIBIOTICI SPECIFICI COMBINATI CON IL TERRENO DI COLTURA.
UTILIZZO VITEK 2:
STEMPERARLA ALL’INTERNO DI ACQUA DISTILLATA O SOLUZIONE SALINA IN UNA PROVETTA
MISCELARE BENE LA COLONIA BATTERICA CON LA SOLUZIONE ATTRAVERSO L’UTILIZZO DI UN VORTEX
PRELEVARE UNA COLONIA ISOLATA DEL BATTERIO TRAMITE UN’ANSA
DETERMINARE LA TORBIDITÀ STANDARD ATTRAVERSO L’UTILIZZO DI UN DENSITOMETRO
LE PROVETTE VENGONO REGISTRATE NEL SISTEMA
LE PROVETTE VENGONO TRASPORTATE AL VITEK 2 DOVE VERRANNO POSTE NEGLI APPOSITI ALLOGGI E PER OGNI CAMPIONE VERRÀ MESSA UNA CARD, UNA PER L’IDENTIFICAZIONE E UNA PER L’ANTIBIOGRAMMA.
IL VITEK 2 È UNO STRUMENTO UTILIZZATO PER L’IDENTIFICAZIONE DI BATTERI E LA DETERMINAZIONE DELLE SUE RESISTENZE AI VARI ANTIBIOTICI TRAMITE L’UTILIZZO DI CARDS.
PER IDENTIFICARE IL BATTERIO, OLTRE AD UTILIZZARE TERRENI SELETTIVI, SI FA LA TIPIZZAZIONE ATTRAVERSO UNO STRUMENTO CHIAMATO
VITEK 2 COMPACT
.
ANTIBIOTICO-RESISTENZA:
DOPO L’INCUBAZIONE IN BASE ALLA LARGHEZZA DEGLI ALONI DI INIBIZIONE CHE SI VERRANNO A FORMARE IN CORRISPONDENZA DI DOVE AVEVAMO DEPOSITATO I DISCHETTI,
SI DETERMINERÀ SE IL BATTERIO DI INTERESSE È SENSIBILE, INTERMEDIO O RESISTENTE NEI CONFRONTI DI UN DETERMINATO ANTIBIOTICO.
VIENE DETERMINATA ATTRAVERSO IL VITEK 2 O ATTRAVERSO L’ANTIBIOGRAMMA CON IL QUALE ANDREMO A DEFINIRE LA CONCENTRAZIONE MINIMA INIBENTE (MIC) OSSIA LA CONCENTRAZIONE MINIMA DI ANTIBIOTICO CHE SERVE PER INIBIRE LA CRESCITA BATTERICA
E LO FAREMO DEPONENDO SULLE COLONIE DEI DISCHETTI A DIVERSE CONCENTRAZIONI DI ANTIBIOTICI.
COLORAZIONI MICROBIOLOGICHE:
3.STEMPERARE LA PORZIONE DI COLONIA PRELEVATA SULLA GOCCIA D'ACQUA.
7.ELIMINARE L'ECCESSO DI COLORANTE CON ACQUA;
6.RICOPRIRE IL PREPARATO CON CRISTAL-VIOLETTO, CHE COLORA LE COMPONENTI ACIDE DELLA PARETE BATTERICA E LASCIAR AGIRE PER DUE MINUTI.
4.ESPORRE IL VETRINO AD UNA FONTE DI CALORE FINO A CHE TUTTA L'ACQUA NON È EVAPORATA.
2.CON UN'ANSA PRELEVARE UNA PORZIONE DI COLONIA DA UNA PIASTRA.
8.RICOPRIRE CON IL REATTIVO DI LUGOL CHE FUNGE DA MORDENTE. LASCIAR AGIRE PER UN MINUTO. FAR SCIVOLARE L'ECCESSO DI LUGOL E DECOLORARE IL VETRINO CON ETANOLO.
1.METTERE UNA GOCCIA DI ACQUA SUL VETRINO PORTAOGGETTI.
5.PREDISPORRE UNA VASCHETTA PER COLORAZIONE E APPOGGIARE I VETRINI SU UN SUPPORTO ORIZZONTALE OPPURE MANTENERE ORIZZONTALE IL VETRINO PORTAOGGETTI CON L'AIUTO DI UNA PINZA PORTA VETRINI.
SI PUÒ FARE LA COLORAZIONE DI GRAM PER I BATTERI:
9.CONTRASTARE CON SAFRANINA PER UN MINUTO. SCIACQUARE CON ACQUA, SGOCCIOLARE IL VETRINO E LASCIARLO ASCIUGARE ALL'ARIA O PASSANDOLO SUL BUNSEN.
10.OSSERVAZIONE: I BATTERI GRAM+ RISULTERANNO DI COLORE VIOLA, MENTRE I BATTERI GRAM- DI COLORE ROSSO.