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LABORATORIO DI FARMACOLOGIA 3 - Coggle Diagram
LABORATORIO DI FARMACOLOGIA 3
CROMATOGRAFIA LIQUIDA (HPLC)
TRA I SUOI VANTAGGI CI SONO LA RAPIDA SEPARAZIONE, LA QUANTIFICAZIONE PRECISA E LA VERSATILITÀ.
TUTTATUTTAVIA, PRESENTA ALCUNI LIMITI, COME COSTI ELEVATI E LA NECESSITÀ DI OPERATORI ESPERTI. VIA, PRESENTA ALCUNI LIMITI, COME COSTI ELEVATI E LA NECESSITÀ DI OPERATORI ESPERTI.
OGNI COMPONENTE VIENE RILEVATO DA UN RIVELATORE (COME UV, FLUORESCENZA, O SPETTROMETRIA DI MASSA),
GENERANDO UN PICCO CHE RAPPRESENTA LA SEPARAZIONE DEI COMPONENTI.
LE COMPONENTI DEL CAMPIONE INTERAGISCONO DIVERSAMENTE CON LA FASE STAZIONARIA, SEPARANDOSI IN BASE A PROPRIETÀ COME POLARITÀ E DIMENSIONI.
È AMPIAMENTE USATA IN FARMACEUTICA PER ANALIZZARE FARMACI, IN TOSSICOLOGIA PER MONITORARE SOSTANZE D'ABUSO,
E IN BIOMEDICINA PER SEPARARE PROTEINE E PEPTIDI.
L'HPLC È UTILIZZATA ANCHE IN ALIMENTAZIONE PER IL CONTROLLO DEI CONTAMINANTI.
FUNZIONA UTILIZZANDO UNA COLONNA CROMATOGRAFICA RIEMPITA CON UNA FASE STAZIONARIA, ATTRAVERSO LA QUALE SCORRE UNA FASE MOBILE LIQUIDA CHE TRASPORTA IL CAMPIONE DA ANALIZZARE.
ESISTONO DIVERSE MODALITÀ DI HPLC, TRA CUI L'HPLC INVERSO (RP-HPLC), CHE È LA PIÙ COMUNE PER SEPARARE COMPOSTI ORGANICI.
LA TECNICA È ALTAMENTE SENSIBILE, ACCURATA E RISOLUTIVA, PERMETTENDO DI SEPARARE ANCHE COMPOSTI CON CARATTERISTICHE SIMILI.
LA CROMATOGRAFIA LIQUIDA AD ALTA PRESTAZIONE (HPLC) È UNA TECNICA AVANZATA UTILIZZATA PER SEPARARE, IDENTIFICARE E QUANTIFICARE LE COMPONENTI DI UNA MISCELA.
NONOSTANTE CIÒ, È UNO STRUMENTO INDISPENSABILE NEI LABORATORI DI RICERCA E DIAGNOSTICA, GRAZIE ALLA SUA AFFIDABILITÀ E ALLA CAPACITÀ DI ANALIZZARE COMPOSTI COMPLESSI.
ANALIZZATORE IMMUNOENZIMATICO
SUCCESSIVAMENTE VIENE AGGIUNTO UN ANTICORPO SECONDARIO LEGATO A UN ENZIMA, CHE, REAGENDO CON UN SUBSTRATO, GENERA UN SEGNALE PROPORZIONALE ALLA QUANTITÀ DELLA SOSTANZA PRESENTE.
QUESTO SEGNALE VIENE QUINDI LETTO DA UNO SPETTROFOTOMETRO.
IL TEST SI ARTICOLA IN DIVERSE FASI: IL CAMPIONE VIENE APPLICATO SU UNA PIASTRA DOVE SONO FISSATI ANTICORPI O ANTIGENI;
SE NEL CAMPIONE È PRESENTE LA SOSTANZA D’INTERESSE, ESSA SI LEGA AL REAGENTE;
GLI ANALIZZATORI IMMUNOENZIMATICI SONO AMPIAMENTE UTILIZZATI IN AMBITO CLINICO, DIAGNOSTICO E SCIENTIFICO.
SONO FONDAMENTALI, AD ESEMPIO, PER LA DIAGNOSI DI INFEZIONI VIRALI (COME HIV O EPATITE), PER IL MONITORAGGIO DI BIOMARCATORI TUMORALI, E NELLA RICERCA IMMUNOLOGICA.
LA TECNICA SI BASA SULL’INTERAZIONE ALTAMENTE SPECIFICA TRA ANTIGENE E ANTICORPO, COMBINATA CON UNA REAZIONE ENZIMATICA CHE PRODUCE UN SEGNALE MISURABILE, SPESSO UN CAMBIAMENTO DI COLORE.
I PRINCIPALI VANTAGGI SONO L’ALTA SENSIBILITÀ, LA SPECIFICITÀ, E LA POSSIBILITÀ DI ANALIZZARE NUMEROSI CAMPIONI IN PARALLELO, RENDENDOLI IDEALI ANCHE PER TEST DI SCREENING SU LARGA SCALA.
L’ANALIZZATORE IMMUNOENZIMATICO, NOTO ANCHE COME ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY), È UNO STRUMENTO DI LABORATORIO UTILIZZATO PER RILEVARE E QUANTIFICARE LA PRESENZA DI ANTIGENI O ANTICORPI IN CAMPIONI BIOLOGICI,
COME SANGUE O SIERO.
ESISTONO DIVERSI TIPI DI ELISA:
DIRETTA, INDIRETTA, SANDWICH E COMPETITIVA, CIASCUNA CON CARATTERISTICHE E APPLICAZIONI SPECIFICHE A SECONDA DEL TIPO DI ANALITA E DELLA SENSIBILITÀ RICHIESTA.
CROMATOGRAFO LIQUIDO
I VANTAGGI PRINCIPALI DELLA HPLC SONO L’ELEVATA PRECISIONE, LA POSSIBILITÀ DI ANALIZZARE ANCHE COMPOSTI TERMOLABILI (CHE NON POSSONO ESSERE ANALIZZATI CON CROMATOGRAFIA GAS),
E LA CAPACITÀ DI TRATTARE CAMPIONI COMPLESSI CON OTTIMA RISOLUZIONE.
IL PRINCIPIO DI BASE CONSISTE NELLA SEPARAZIONE DEI COMPOSTI DI UNA MISCELA IN FUNZIONE DELLA LORO DIVERSA AFFINITÀ PER DUE FASI:
UNA FASE MOBILE (LIQUIDA) E UNA FASE STAZIONARIA (SOLIDA O SUPPORTATA SU UN SOLIDO).
LA MISCELA VIENE INIETTATA NEL SISTEMA E TRASPORTATA DALLA FASE MOBILE ATTRAVERSO UNA COLONNA CONTENENTE LA FASE STAZIONARIA.
LE APPLICAZIONI DELLA CROMATOGRAFIA LIQUIDA SONO ESTREMAMENTE VASTE:
È USATA IN CHIMICA ANALITICA, FARMACEUTICA, BIOTECNOLOGIE, ANALISI AMBIENTALI, E CONTROLLO QUALITÀ PER IDENTIFICARE E QUANTIFICARE PRINCIPI ATTIVI, CONTAMINANTI, O METABOLITI.
UN CROMATOGRAFO LIQUIDO È COMPOSTO DA:
•INIETTORE, PER L’INTRODUZIONE CONTROLLATA DEL CAMPIONE;
• SOFTWARE DI ACQUISIZIONE E ANALISI DATI.
•RIVELATORE, CHE REGISTRA IL PASSAGGIO DEI VARI COMPOSTI (I PIÙ COMUNI SONO UV-VIS, FLUORESCENZA, E SPETTROMETRIA DI MASSA);
•COLONNA CROMATOGRAFICA, IL CUORE DEL SISTEMA DOVE AVVIENE LA SEPARAZIONE;
•POMPA, CHE SPINGE LA FASE MOBILE CON PRESSIONE COSTANTE O PROGRAMMATA;
I DIVERSI COMPONENTI DELLA MISCELA INTERAGIRANNO IN MODO DIVERSO CON LA FASE STAZIONARIA E USCIRANNO DALLA COLONNA IN TEMPI DIFFERENTI,
DANDO ORIGINE A PICCHI DISTINTI NEL CROMATOGRAMMA, CHE È IL RISULTATO GRAFICO DELL’ANALISI.
LA TECNICA PIÙ COMUNE È LA HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY), OVVERO LA CROMATOGRAFIA LIQUIDA AD ALTE PRESTAZIONI,
CHE GARANTISCE ALTA RISOLUZIONE, SENSIBILITÀ E VELOCITÀ NELL’ANALISI.
IL CROMATOGRAFO LIQUIDO È UNO STRUMENTO ANALITICO UTILIZZATO PER SEPARARE, IDENTIFICARE E QUANTIFICARE I COMPONENTI DI UNA MISCELA,
SFRUTTANDO IL PRINCIPIO DELLA CROMATOGRAFIA LIQUIDA.