Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Digital PCR(dPCR) - Coggle Diagram
Digital PCR(dPCR)
ความหมาย (Definition)
:star:
เป็นเทคโนโลยี PCR รุ่นใหม่
:star:
ไม่ต้องใช้ standard curve
:star:
Absolute quantification
:star:
แบ่งปฏิกิริยาเป็น micro-reactions
:star:
ใช้หลักการ Poisson distribution
:star:
พัฒนาจากข้อจำกัดของ qPCR
หลักการทำงาน (Principle)
:pencil2:
Step 1: เตรียม reaction mix (DNA template + primers + probe + mastermix)
:pencil2:
Step 2: Compartmentalization → แบ่งเป็นหมื่นๆ microchambers/droplet
:pencil2:
Step 3: Thermocycling (PCR amplification ในแต่ละช่องแยก)
:pencil2:
Step 4: End-point detection → นับ positive / negative
:pencil2:
Step 5: คำนวณจำนวนสำเนา (copies) ด้วย Poisson statistics
ประโยชน์/การประยุกต์ (Applications)
การแพทย์ (Medical & Clinical)
:<3:
Monitoring minimal residual disease (MRD)
:<3:
Cancer mutation detection
:<3:
Gene & cell therapy monitoring
:<3:
Precision medicine
:<3:
Liquid biopsy
:<3:
ตรวจ viral load (HIV, HBV, HCV, COVID-19)
สิ่งแวดล้อม (Environmental)
:recycle:
ติดตาม antibiotic resistance genes
:recycle:
Wastewater surveillance (เช่น COVID-19)
:recycle:
ตรวจจุลชีพก่อโรคในน้ำ/ดิน
งานวิจัยพื้นฐาน (Research)
:pen:
Gene expression studies
:pen:
Rare mutation detection
:pen:
Copy number variation (CNV) analysis
:pen:
Validation ของการตัดต่อยีน (CRISPR)
อาหารและเกษตร (Food & Agriculture)
:unlock:
Food authenticity (Halal/Kosher testing)
:unlock:
GMO detection
:unlock:
Pathogen detection (Salmonella, Listeria, E. coli)
:unlock:
ตรวจการปลอมปนเนื้อสัตว์ในอาหาร (meat adulteration)
จุดเด่น (Advantages)
:check:
Absolute quantification (ไม่ต้องใช้มาตรฐาน)
:check:
ความแม่นยำสูง (precision)
:check:
ตรวจจับ low copy number ได้ดี
:check:
ทนต่อ PCR inhibitors
:check:
Multiplex detection (ตรวจหลาย target พร้อมกัน)
:check:
ข้อมูล reproducible ข้ามห้องแล็บได้
ข้อจำกัด (Limitations)
:forbidden:
ราคาสูง (เครื่องมือและ consumables)
:forbidden:
Sample throughput ต่ำกว่าบางเทคนิค
:forbidden:
ต้องใช้ software เฉพาะในการวิเคราะห์
:forbidden:
เทคโนโลยียัง “ใหม่” → ยังไม่แพร่หลายเท่า qPCR
การเปรียบเทียบ (qPCR vs dPCR)
qPCR
:explode:
ต้องมี standard curve
:explode:
Sensitive ต่อ inhibitors
:explode:
Ct values (เทียบข้ามแล็บไม่ได้)
:explode:
Relative quantification
dPCR
:fire:
แม่นยำกว่าใน low abundance
:fire:
ไม่ใช้ standard curve
:fire:
ผลรายงานเป็น copies/µL → เทียบข้ามแล็บได้
:fire:
Absolute quantification