Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

DIGITAL PCR (dPCR), นางสาวสายสุณี หวังสกุล 6604071630446 - Coggle Diagram

- - - - ⭐️Food Safety: ตรวจสิ่งปนเปื้อน/ความถูกต้องของอาหาร
        
        ⭐️การแพทย์แม่นยำ (Precision Medicine): ตรวจยีนมะเร็ง
        
        ⭐️เกษตรกรรม (Agriculture): ตรวจโรคพืช, GMO
- - - - 🚩 วิเคราะห์ตัวอย่างได้จำกัดเมื่อเทียบกับ qPCR
        
        🚩 ระบบซับซ้อน ต้องใช้ microfluidics/droplet
        
        🚩 ใช้เวลามากกว่าบางเทคนิค
        
        🚩 ความเสี่ยงต่อการปนเปื้อนและความผิดพลาด: ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่ยุ่งยากและการถ่ายโอนหลายขั้นตอน ทำให้มีความเสี่ยงต่อการปนเปื้อนข้ามหรือข้อผิดพลาดอื่นๆ
  - - - 💥ตรวจเป้าหมายที่มีปริมาณต่ำได้ดี
        
        💥ทนต่อสารยับยั้ง PCR (PCR inhibitors)
        
        💥 การวัดปริมาณเชิงสัมบูรณ์: ให้ผลลัพธ์เชิงปริมาณสัมบูรณ์ได้โดยไม่ต้องใช้ค่าอ้างอิง ทำให้การวัดมีความน่าเชื่อถือและลดความผันแปร
- - - - ปฏิกิริยา PCR หรือ ตัวอย่าง DNA หรือ RNA จะถูกแบ่งออกเป็นหยดหรือปฏิกิริยาย่อยเล็กๆ จำนวนมาก ซึ่งแต่ละหยดจะมีโมเลกุลเป้าหมายเพียง 1 โมเลกุล หรือไม่มีเลย (ตรวจด้วย fluorescence)
      - ⛳️การเทอร์โมไซเคิล (Thermal Cycling)
        
        เพิ่มจำนวน DNA หรือ RNA เป้าหมาย โดยเครื่อง PCR จะนำตัวอย่างไปผ่านกระบวนการเทอร์โมไซเคิล โดยใช้ขั้นตอนการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอเหมือน PCR ทั่วไป (Denaturation, Annealing, Extension) เพื่อขยายสารพันธุกรรมเป้าหมายภายในแต่ละหยด
        
        ⛳️การวิเคราะห์ผล (Analysis)
        
        หลังจากเทอร์โมไซเคิลเสร็จสิ้น แต่ละหยดจะถูกอ่านค่าฟลูออเรสเซนซ์ โดยสัญญาณฟลูออเรสเซนต์จะบ่งชี้ว่าหยดนั้น ๆ มีการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอเป้าหมาย (เป็นบวก) หรือไม่ และจะใช้สถิติ (เช่น Poisson) เพื่อช่วยคำนวณจำนวนโมเลกุลเป้าหมายในตัวอย่างเริ่มต้น ทำให้ได้ผลลัพธ์ความเข้มข้นที่แม่นยำ