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Biocell : Méthodes d'étude -P5 - Coggle Diagram
Biocell : Méthodes d'étude -P5
ME à balayage
Balayage éch recouvert fine couche met lourds par faisc e- : images détaillées de la surface
Cryofracture/cryodécapage
Fracturer un éch à basse T -> révéler structs int
; fract aléatoire, lg plans de faiblesse co interfaces entre C ou membr C
Env nucl
Microscopie à force atomique
Microsc haute résol -> obtenir des
images 3D
de
surface
d'un éch à
échelle atomique
Sonde phys, dépla à surf, donnant infos topograph détaillées ; interactions pointe-surf -> mouvt du bras, détecté par faisc laser & enregistré niv détecteur
Résol ordre
nm
, obs atomes indiv ds certains cas ; imager surf
sans endommager éch
Etudes fonctionnelles
Pulse chase
Etudier façon dyn
devenir molcs ds C
, suivi cin
Pulse
= Incorp précurseur radiomarqué pdt tps court ;
3H-thymidine
pour
ADN
,
3H ou 14C-Leu, ou 35S-Met
pour
prots
(étudier trad),
32P
pour
phosphorylations
(a nucl et prots)
Chase
= incorp du
précurs non radiomarqué
-> études au cours du tps de molc marquée
Lyse
des C à diff temps
Fractionnement C par
centrifug différentielle
Analyse par
Western blot
des constituants
t0 : RE
t1 : golgi
t2 : prots ds ves sécrétion
t3 : mil extrac
Patch Clamp
Mesure c intraC en ions
Mesure flux ionique niv canal membranaire (potentiel de membrane) : pipette micrométrique (patch) et 2 électrodes de part et d'autre de membr : électrodes reliées à oscilloscope
Etude antagonistes et agonistes sur canaux récepteurs