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Biocell : Méthodes d'étude - P3 - Coggle Diagram
Biocell : Méthodes d'étude - P3
Transfection
Introduire du matériel génétique dans les C eucas
pour : étud fct gène, modif express génique, prod prots recombinantes
Plasmides
: portent gène codant d'une prot souhaite faire exprimer
Virus
: gène codant une prot souhaite faire exprimer ; infection de C et transfert génome
siRNA
:
ARN interférence
: utiliser ARN pour arret express une prot (se fixe sur son ARM)
Compl lipidiques/liposomes : cationiques contenant a nucl : interag surf c (
chaines d'héparane sulfate
) : endoc compl lip, lib intraC a nucl - - > intégrer génome C
Polymères à base de sulfate de calcium
: chargés +, interag avec a nucl à transfecter, endoc par C
Electroporation
: électroporateur, choc élec -> perfos membr C, a nucl passe et intègre génome
Micro-injection
: injecter a nucl ds noy grâce micro aiguille ss microscope
Optoperforation
: micro trous par laser ss microscope -> injecter a nucl ds noy
2 types
Transitoire
: mat gen introd pdt pér donnée, pas intégré génome: études court terme,
prod rap de prots
Stable
: intégré permanente, expression contin, stable, sélection des C transfectée aide
marqueurs de résist aux antibio
Applications
Etude
fonction gènes
: surexpr/red expr : rôle ds process C
Prod
prots recomb
:
prots thérap (insul), Ac, biomolcs intéret
Thérap génique
: corriger mutations, copies fonctionnelles
CRISPR-Cas9
Dév modèles C
: lignées C stables créées :
étude maladies, test méds, explo mécas biol
Anticorps
: immunoglob prod par lymphocytes : 2 c lourdes & é légères
Comportant des doms csts et variables : paratope reco épitope de l'Ag : interac épitope-paratope
3 parties
:
Fv
= dom var c
contenant paratope
: reco trs spé et forte affin, 1 Ag peut avoir plsieurs épitopes ;
Fab
;
Fc
: partie term,
doms csts chaines lourdes
: id à ts ds mm esp
Polyclonaux
: plsieurs Ac reco diff épitopes
Monoclonaux
: un seul type Ac dirigé contre un seul type Ag
Utilisation dans
toutes méthodes "immuno"
Couplé à enzyme :
immunohistochimie, immunoblot, ELISA
: enz
peroxydase de Raifort = HRP, bêta-galactosidase = BGal, phosphatase alcaline = PAL
transf substrat nn coloré en prod coloré
Couplé à
flurorochrome
: tech
microscopie à fluo
: visualis molc dans C
Couplé à des billes d'or (colloïdal)
:
ME
: arret e-
Immunoprécipitation
:
purif de prots, études interactions
2 types de méthodes
Directes
: un seul Ac marqué
Indirectes
: utilis 1er Ac non marqué :
Ac primaire
& second Ac
secondaire
, reco Ac prim : amplifier signal, plsieurs 2aires fixés à un primaire