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Biocell : Méthodes d'études - Coggle Diagram
Biocell : Méthodes d'études
Modèles
Animaux
Souris et rats
Génétique, physiologie, pathologies
Zebrafish
Génétique, développement et toxico
Drosophila melanogaster
Génétique, développement
Caenorhabditis elegans (nématode)
Développement et neurobio
Simil avec humains, systs complexes, modèles maladies hum MAIS éthique, coût et diff inter-esp - - > transposabilit" des résultats ?
Organismes modèles
Gén bien étudiée, outils, temps génération court, - probls éthiques MAIS complexités inf et transposabilité
In vitro
Contrôle env, facilité, reproductibilité MAIS manque complexité et limité certaines C
3D in vitro (sphéroïdes) ; C culture sphère/matrice gel
proche rencontré physiolt, étude diff et gradients MAIS + complexe et manip et obs + difficiles
Organoïdes (plsieurs types C dans mm mil cult)
Reprod struct et fonctions organes, red tests anim, étude différenciation & interactions MAIS + complexe, variabilité et coût
Modèles infos/simul
0 probl éthique, rap et coût red, systs complexes MAIS données exp nécess et précision limitée
Méthodes de dissociation des cellules
Enzymatique
Hydrolyse des C de matrice extraC - - >
collagénase
et
trypsine
Large gamme de tissus, rapide
Endommagement de certaines C
Mécanique
Moyens physiques pour sép C
Utilisable sur tissus fragiles
Moins efficace, laborieux, long
Chimique
solutions chim perturbant interact°s C :
EDTA
(calcium prots mat extraC)
Douces, combis avec autres meths
Moins efficace sur tissus très denses, trait prolongé
Cults C
Primaire
à partir d'un tissu directement prélevé : repres fidèle état physiol, mais durée de vie limitée (C très différenciées, perte de caracts c et peu de passages, sensibles conds cult et contamination)
Lignées cellulaires : à partir de cellules cancéreuses ou immortalisées, très nbreuses
Durée de vie prolongée, possibilité de passages successifs MAIS moins repres et mutations
Conds de culture
Sels min
Nutriments én
AAs
Cofacteurs enzymatiques
Facteurs de croiss
Rouge de phénol (milieu acide --> jaune, alcalin --> violet)
Antibio et antimycotiques
Incubateur thermorégulé, 37°C, 100% humidité, atm à 5% CO2, 95% air ; asepsie avec manip sous hôte à flux laminaire
2 types : + en suspension (origine sanguine), + adhérentes à un support
Adhérentes : études de croissance : phase de latence, phase exponentielle, stationnaire/de confluence, phase de lyse
Méthodes de tri des cellules
Filtration
Tamis de porosités différentes, fonction taille, + grosses bloquées
Simplicité et rapidité, élim débris C MAIS grossière
Centrifugation en gradients de densité
Sép C selon densité, haute résolution, + précise ; gradient préformé ou néoformé
Zonale : en fct de taille des macromolcs grace gradients nat ou synthétiques,
continus
, rho partics < mil
A l'équilibre ou isopycnique : densité des macromolcs, gradients
discontinus
, arret sédim quand rho =
Microdissections laser
Coupes histo, Ac marqué par fluorochrome, reco spé Ag membr & avec microsc laser --> scalpel pr isoler zone tissu
Tissu épithélial, dissection d'une crypte colique
Tri c par cytométrie en flux (FACS)
C en suspension passent une à une devant faisc cytomètre, Ac marqué fluorochrome reco spé Ag membranaires surf C, fluorescer, détecteur les sép
Tri C/comptage, analyse du cycle C
Immuno-isolement (MACS)
C en suspension passent devant aimant, Ac couplé à bille magnétique reco spét Ag membr surf C - - > C couplées bille isolées