Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Digital PCR - Coggle Diagram
Digital PCR
-
-
Evolution of PCR
Conventional PCR
- ตรวจแบบ Endpoint 2. หลังการทำ PCR → ผลลัพธ์เป็นแบบกึ่งปริมาณ (Yes/No) 3. มีความแปรปรวนสูง 4. ไวต่อสารยับยั้ง PCR
Real-Time PCR (qPCR)
ตรวจแบบ Real-time ระหว่างการ Amplification → ทำ Relative Quantification แต่ต้องใช้ Standard Curve, อาจเกิด Amplification Bias, ความแม่นยำลดลงเมื่อ Ct สูง
ตรวจวัด สัญญาณเรืองแสง (Fluorescence) ขณะ PCR กำลังเกิดขึ้น → เพื่อดูการเพิ่มจำนวน DNA แบบ Real-Time
-
-
Digital PCR
ตรวจ Endpoint หลังการทำ PCR เช่นเดียวกับ conventional แต่เพิ่ม การแบ่งปฏิกิริยาออกเป็นหลาย ๆ ช่อง (Compartmentalization) → สามารถทำ Absolute Quantification โดยไม่ต้องใช้ Standard Curve, ความแม่นยำและความไวสูง, ทนต่อสารยับยั้ง
แบ่งปฏิกิริยา PCR ออกเป็น หลายพันไมโครแชมเบอร์ (20,000+)
คำนวณจำนวน DNA โดยใช้ Poisson Model → สามารถวัดปริมาณ DNA ได้แบบ Absolute Quantification โดยไม่ต้องใช้ Standard Curve