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CROMATOGRAFÍA
Definición y conceptos inherentes
que es
Técnica analítica para separar, identificar y purificar los componentes de una mezcla, basada en su distribución diferencial entre una Fase Estacionaria y una Fase Móvil.
conceptos inherentes
Eluato
Fracción de la fase móvil que sale de la columna, conteniendo los componentes separados.
Fase Estacionaria (FS)
Fase fija, inmóvil. Puede ser un sólido o un líquido inmobilizado sobre un soporte sólido
Fase Móvil (FM)
Fase que se desplaza, arrastrando la muestra a través de la fase estacionaria. Puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico.
Eluyente
Sinónimo de fase móvil, especialmente en columna.
Cromatograma
Resultado gráfico o visual de la separación.
Analito
Sustancia que se quiere separar y analizar
Clasificación de métodos cromatográficos
Por mecanismo de separación
Por partición
Mecanismo: Diferente solubilidad del analito entre dos fases líquidas inmiscibles (FM y FS).
Ejemplo: HPLC Fase Reversa (C18), Papel.
Por adsorción
Mecanismo: Adhesión diferencial (adsorción) de los componentes a la superficie de un sólido activo (FS).
Ejemplo: TLC en placa de sílica, HPLC Fase Normal.
Por intercambio iónico
Mecanismo: Atracción electrostática entre iones de la muestra y grupos cargados en la FS.
Ejemplo: Purificación de proteínas, análisis de iones en agua.
Por exclusión de tamaño (gel)
Mecanismo: Separación por tamaño molecular. Moléculas grandes eluyen primero; pequeñas penetran poros y eluyen después.
Ejemplo: Determinación de pesos moleculares de polímeros.
Por afinidad
Mecanismo: Interacción bioquímica específica, reversible y selectiva (ej: anticuerpo-antígeno).
Ejemplo: Purificación de anticuerpos.
Por estado físico de las fases
De líquidos
Líquido-Líquido (LLC): FM líquida, FS líquida.
Líquido-Sólido (LSC): FM líquida, FS sólida. Ejemplo: HPLC, TLC.
De gases
Gas-Líquido (GLC): FM gas, FS líquida. Ejemplo: GC con columna capilar.
Gas-Sólido (GSC): FM gas, FS sólida. Menos común.
Por modo de elución
Isocrática
Definición: La composición de la fase móvil se mantiene constante durante toda la separación.
En gradiente
Definición: La composición de la fase móvil cambia de forma programada (ej: aumento gradual de la polaridad) para mejorar la separación.
Por dimensión
Unidimensional
Definición: La separación se realiza en una sola dirección con un único sistema de solventes.
Ejemplo: Una TLC corrida una vez.
Bidimensional
Definición: La separación se realiza en dos direcciones (giro de 90°), usualmente con dos sistemas de solventes diferentes, para una resolución mucho mayor.
Ejemplo: 2D-TLC, Cromatografía 2D en columna (GCxGC).
