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Biologia 18 y 20 de Agosto - Coggle Diagram
Biologia 18 y 20 de Agosto
El microscopio ocupa reactivos para darle fluorescencia a las células que vamos a ver, dicho reactivo tiene que ser compatible con la membrana celular
(Anticuerpos con fluorescencia)
El microscopio tiene 3 ejes por lo que es 3D
citoesqueleto de actina y tubulina
Microscopia confocal
Confocal de fluorecencia
Confocal de reflectancia
Confocal del barrido láser
Raman confocal
Microscopio Electrónico de transmisión
Funcionamiento -> Se genera un haz de electrones aceleradla a trávés de un voltaje alto
2D Atraviesa, estructura interna
Microscopio Electrónico de Barrido creado en 1984, derivado de los electrónicos, a diferencia de los otros este ocupa electrones en lugar de un haz de luz
Ocupado en la industria debido a su alto coste
Elemento que nos ayuda a generar el haz para el barrido -> Tungsteno
3D, Barrido Estructura externa
Citoquimica
Se encarga del estudio de la composición química de las celulas
Ayuda a distinguir leucémias mieloides vs linfoides
Inmunohistoquímica
Se utiliza en detección de cancer de mama
Como uso anticuerpos me va dar información específica
Cultivo celular es una técnica de laboratorio que permite mantener células vivas fuera de su entorno natural
Tipos
Primarios
Obtenidos de un tejido vivo por métodos enzimáticos o mecánicos, son heterogéneos, tiene una vida útil lliitada, sirven para realizar estudios celulares
Sirve como huéspedes para infectarlas con virus y crear vacunas
Solo es un paso
Rara vez se tiene un cultivo primario homogéneo
Secundarios
Mantener la viabilidad celular, busca evitar la sobreconfluencia, expandir el número de células, mantener la linea celular
Se derivan del cultivo primario, se traspasa a otra placa, recipiente, etc. para mantener la vitalidad del cultivo
Uso de tripxina
Cada traspaso implica que va a perder caracteristicas originales
de un paso
Lineares
Primarias
Continuas
Celulares especíalizadas
Aplicaciones
Células VERO
Células A549
Células U87MG
Electroforesis
Separar moléculas cargadas, según su tamaño, carga eléctrica y peso
Pasos
Separacion
Revlelación
Aislamiento
Identificación
Prueba confirmatoria de VIH (Western-Blot)
SDS - PAGE + Anticuerpos
Las banditas en la tiras significa que el paciente es positivo a VIH
Gel de poliacrilamida para Proteinas
Gel de agarosa para ácidos nucleotidos
A membrana de nitrocelulosa
Puede ser el inicio de muchas otras técnicas
Purificación de Ácidos Nucleicos
Lipiar los ácidos nucleicos de las muestras
Principios
Cromatografia de penetrabilidad (Filtracion en gel)
Cromatografia de intercambio ionico
Cromatografia de Absorción
Ultrafiltración
Bolas Magneticas
Fases
Liberación de Acidos Flucleicos
Protección
Eliminación de Enibihidores
Concentración de la muestra
Dilución en medio compatible
Protocolo universal de extracción del DNA
Aplicaciones
Diagnostico molecular
PCR
Secuenciacipon genetica
Terapia genetica
Análisis estructurales
PCR
cebadores, oligonucleotidos o primers es lo mismo
De 50 a 60 ciclos
Por cada molecula de ADN yo tengo 2 templetes
Desnaturalización a 94 C
C G puentes de hidrógeno
A T puentes de hidrógeno
Elementos de la reacción, Primer, Nucleotidos, ADN molde y Polimerasa
Tipos de PCR
PCR tiempo final -> SI huno o no hubo amplificación al final, se evalúa en gel de agarosa
RT - PCR, se realiza con RNA, se ahace una retro-transcripción previo a la desnaturalización,, aliniamiento y extension.
qRT - PCR. es cuantitativa, tengo cierta cantidad de ADN
Sirve para hacer seguimiento a pacientes de VIH
Umbral -> Determina si es un resultado positivo o negativo, si no pasa del umbral es negativo
Valor de CQ o CT, punto donde la curva pasa el umbral
Cada canal tiene su propio umbral
