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FLUOROCROMI E TECNICHE DI COLORAZIONE - Coggle Diagram
FLUOROCROMI E TECNICHE DI COLORAZIONE
INTRO
POSSONO ESSERE CLASSIFICATE IN
2 GRANDI GRUPPI IN BASE ALL'AFFINITÀ NEI CONFRONTI DELLE COPPIE DI BASI AT O GC.
SONO QUINDI IN GRADO DI PRODURRE UN PATTERN DI BANDEGGIO Q (AT)
PATTERN DI BANDEGGIO R (GC).
ESISTONO MOLTE MOLECOLE LA CUI FLUORESCENZA È INFLUENZATA DALLA COMPOSIZIONE IN BASI DEL DNA AL QUALE ESSE SI LEGANO.
CROMOMICINA A3
IL PATTERN DI TIPO R PUÒ ESSERE MIGLIORATO MEDIANTE
L'USO DI CONTROCOLORANTI CHE PRESENTANO UN LEGAME PREFERENZIALE X LE BASI AT (DISTAMICINA A O NETROPSINA)
OPPURE DI MOLECOLE CHE FUNGONO DA ACCETTORI DI TRASFERIMENTO DI ENERGIA ELETTRONICA (METHYL GREEN).
ANCHE L'OLIVOMICINA, MOLECOLA SIMILE ALLA CROMOMICINA A3 È IN GRADO DI PRODURRE UN BANDEGGIO DI TIPO R.
LEGAME PREFERENZIALE CON LE COPPIE DI BASI GC.
BANDEGGIO NOR (NUCLEOLAR ORGANIZER REGIONS)
AG-NOR EVIDENZIA SOLO I NORS ATTIVI (DA 4 A 8 X METAFASE NEI DIVERSI INDIVIDUI)
X CUI NELLA COLORAZIONE SONO COINVOLTE PROTEINE ASSOCIATE ALL'ATTIVITÀ TRASCRIZIONALE.
NEI MAMMIFERI, LE REGIONI COLORATE CORRISPONDONO ALLE COSTRIZIONI SECONDARIE SUI BRACCI CORTI DEI CROMOSOMI ACROCENTRICI (GRUPPO D E G)
(CLUSTER DEI GENI RDNA 18S, 285 E 5,85).
TRATTAMENTO CON L’ARGENTO (BANDEGGIO AG-NOR).
FISH (OSSIA IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE.)
SFRUTTA LA CAPACITÀ DI MOLECOLE A SINGOLO FILAMENTO, CON SUFFICIENTE GRADO DI COMPLEMENTARIETÀ, DI IBRIDARE, OSSIA DI FORMARE UNA MOLECOLA A DOPPIO FILAMENTO.
TECNICA DI CITOGENETICA MOLECOLARE CHE PERMETTE DI LOCALIZZARE ED INDIVIDUARE SPECIFICHE SEQUENZE DI ACIDO NUCLEICO SU
CROMOSOMI, SU NUCLEI INTERFASICI O SEZIONI DI TESSUTI OTTENUTI DA QUALUNQUE MATERIALE BIOLOGICO
CORRELAZIONE TRA DNA-CROMOSOMI.
METODO DIRETTO
IL LEGAME SONDA-REPORTER DEVE RESISTERE ALLE CONDIZIONI DI IBRIDAZIONE E DI LAVAGGIO
GLI IBRIDI POSSONO ESSERE OSSERVATI AL MICROSCOPIO IMMEDIATAMENTE DOPO L'IBRIDAZIONE
LA MOLECOLA REPORTER NON DEVE INTERFERIRE CON LA REAZIONE DI IBRIDAZIONE.
MOLECOLA "REPORTER" LEGATA DIRETTAMENTE ALLA SONDA DI ACIDO NUCLEICO (NUCLEOTIDI CONIUGATI AL GRUPPO FLUOROFORO).
METODO INDIRETTO
LA PRESENZA DELLA MOLECOLA REPORTER NON DEVE INTERFERIRE CON LA REAZIONE DI IBRIDAZIONE O SULLA STABILITÀ DELL'IBRIDO RISULTANTE.
LA MOLECOLA REPORTER DEVE ESSERE ACCESSIBILE AGLI ANTICORPI.
2 SISTEMI MAGGIORMENTE USATI:
BIOTINA - AVIDINA
DIGOSSIGENINA - ANTICORPO ANTIDIGOSSIGENINA
LA SONDA CONTIENE UNA MOLECOLA REPORTER INTRODOTTA CHIMICAMENTE O ENZIMATICAMENTE, EVIDENZIABILE X AFFINITÀ CITOCHIMICA
SONDE X PAINTING
LE SONDE X IL PAINTING VENGONO PRODOTTE O CON PURIFICAZIONE DEI CROMOSOMI MEDIANTE SEPARAZIONE A FLUSSO
E SUCCESSIVA PCR CON PRIMERS DEGENERATI O X MICRODISSEZIONE DI NORMALI CROMOSOMI METAFASICI,
SEGUITA DA AMPLIFICAZIONE DI DNA INDIPENDENTE DALLA SEQUENZA.