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Tema 6: Estudio de los procesos de crecimiento y desarrollo en vegetales…

- - - - Ambiente de trabajo: se usa una cabina de flujo laminar con filtros HEPA (0,2 µm) que generan presión positiva y aire estéril para evitar la entrada de contaminantes.
        
        Instrumental: se esteriliza con calor en esterilizadores dentro de la cabina (ya no se usa fuego por riesgo de contaminación aérea).
        
        Medios de cultivo: se esterilizan en autoclave a 121 °C durante 20–30 minutos.
        
        Material vegetal: se desinfecta con lejía al 2% (o comercial al 10%) durante 5–30 minutos, seguido de lavados con agua destilada estéril.
        
        Superficie de trabajo: se limpia con alcohol al 75%, que desinfecta pero no esteriliza.
        
        Material de laboratorio: se usan placas de Petri estériles de vidrio.
    - - Se utilizan medios nutritivos completos, siendo el más común el medio MS (Murashige y Skoog).
        
        Contiene sales minerales esenciales, micronutrientes, vitaminas (cofactores enzimáticos) y azúcar como fuente de energía.
        
        El azúcar se añade para que la planta no invierta energía en obtenerla, sino que centre su metabolismo en la morfogénesis inducida por hormonas (auxinas y citoquininas).
        
        El metabolismo de las plantas en cultivo es mixótrofo (mezcla de fotosíntesis y consumo de azúcares del medio).
        
        Normalmente se usan medios sólidos o semisólidos, gelificados con agar.
        
        El pH del medio debe ajustarse al valor del apoplasto, alrededor de 5,7.
    - - Fotoperiodo: Depende de la especie; algunas requieren fotoperiodo largo (16 h luz / 8 h oscuridad) y otras corto. Temperatura: Normalmente 25 °C, salvo necesidades específicas de cada planta. Aire: Debe estar libre de contaminación, ya que los tarros no están completamente sellados (se necesita intercambio gaseoso). Irradiancia: La intensidad de luz óptima está entre 25-50 µmol m⁻² s⁻¹, y se mide con un radiómetro.
    - - Se parte de un explanto, en este caso, una sección nodal (metámero del tallo con una yema axilar). Se cultiva en medio con citoquininas, que inducen el desarrollo de las yemas axilares. En aprox. 1,5 meses, se pueden obtener 6 nuevas plantas genéticamente idénticas a partir de una sola sección. El proceso permite una propagación exponencial. La Paulownia se cultiva por su valor en papel, madera y otros productos industriales.
    - - Es la formación de órganos (raíces o tallos) sin intervenir los meristemos.
        
        El órgano que se forme depende del balance auxinas/citoquininas: Bajo → se forman tallos (más citoquininas). Alto → se forman raíces (más auxinas).
        
        En fresa, a partir de discos de hoja y un medio con balance bajo, se generan tallos → luego se estimulan con citoquininas para multiplicar ramas → después se induce enraizamiento.
        
        Las plantas se aclimatan antes de pasarlas a suelo o invernadero por los cambios de humedad relativa.
        
        La organogenesis puede ser: directa (el órgano se forma directamente del explanto.) o indirecta (primero se forma un callo (células indiferenciadas), del cual luego se origina el órgano.)
    - - Es la formación de embriones a partir de células somáticas (no sexuales), como las de una hoja. Se basa en la totipotencia celular: cualquier célula vegetal puede generar una planta completa. El embrión somático es igual al embrión cigótico en estructura y desarrollo, pero no proviene de la fecundación. Se obtienen clones genéticos del tejido de origen. Suele ser un proceso indirecto, con formación de un callo embriogénico en medio con auxinas. Los embriones en desarrollo se separan del callo y pueden originar más embriones. Para madurar, se cambia a un medio sin hormonas, siguiendo el mismo proceso que los embriones cigóticos. Son estructuras bipolares (con yema apical y raíz), por lo que no es necesario inducir raíces o tallos por separado.