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CLONAGGIO, SEPARAZIONE DEL GENE DI INTERESSE - Coggle Diagram
CLONAGGIO
CLONAGGIO GENICO
TECNICA BASE DELLE BIOTECNOLOGIE MODERNA
SEPARAZIONE DEL GENE DI INTERESSE
IL GENE È INSERITO IN UNA MOLECOLA DI DNA PLASMIDICO MODIFICATO (VETTORE DI CLONAGGIO)
DNA RICOMBINANTE INSERITO IN UNA CELLULA OSPITE GENERALMENTE UN BATTERIO
IL GENE MARCATORE DI SELEZIONE UTILIZZATO PER SEPARARE LE CELLULE BATTERICHE CHE HANNO INCORPORATO IL DNA RICOMBINANTE, TRAMITE L'UTILIZZO DI UN ANTIBIOTICO
VETTORE SI REPLICA COSÌ CHE PUÒ ESSERE ISOLATO E STUDIATO
VETTORI DI CLONAGGIO
CATATTERISTICHE
DIMENSIONI INFERIORI RISPETTO ALLA CELLULA OSPITE
ORIGINE DI REPLICAZIONE: UN SITO RICONOSCIUTO DALLA DNA POLIMERASI E DALLA CELLULA OSPITE
PRESENZA DI UN GENE MARCATORE DI SELEZIONE CHE PERMETTE DI RICONOSCERE LE CELLULE OSPITI
PRESENZA DI UN SITO MULTIPLO DI CLONAGGIO
INSERIMENTO VETTORI NELLE CELLULE OSPITI
L'INTRODUZIONE DI DNA ESTRANEO IN CELLULE OSPITI È DETTA TRASFEZIONE.
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INTRODUZIONE DI DNA ESOGENO IN UNA CELLULA OSPITE ARTIFICIALMENTE
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I PIÙ UTILIZZATI SONO I PLASMIDI
MOLECOLE DI DNA CIRCOLARE OTTENUTE TRAMITE MANIPOLAZIONI GENETICHE DI PLASMIDI BATTERICI NATURALI
SI REPLICANO AUTONOMAMENTE PERCHÉ HANNO UN’ORIGINE DI DUPLICAZIONE
È POSSIBILE AGGIUNGERE SOLO PICCOLI FRAMMENTI DI DNA ESOGENO
ALTRIMENTI SI UTILIZZANO VETTORI PIÙ GRANDI COME I VIRUS
ENZIMI DI RESTRIZIONE
PRIMO PASSAGGIO DEL CLONAGGIO
SI UTILIZZANO PER SEPARARE IL FRAMMENTO DI DNA CHE VOGLIAMO CLONARE UTILIZZANDO GLI ENZIMI DI RESTRIZIONE (ENDONUCLEASI DI RESTRIZIONE)
LE ENDONUCLEASI DI RESTRIZIONE FANNO PARTE DELLA DIFESA NATURALE DEI BATTERI CHE LE PRODUCONO PER DEGRADARE IL DNA DEI VIRUS
IDROLIZZANO IL LEGAME FOSFODIESTERICO TRA I 2 NUCLEOTIDI
TAGLIANO I FILAMENTI DI DNA IN CORRISPONDENZA DI UNA SPECIFICA SEQUENZA BERSAGLIO
ESISTONO 2 TIPI DI TAGLI:
PIATTO
SFALSATO
TROVIAMO UN’UNIONE PIÙ SEMPLICE TRA BASI AZOTATE, PERCIÒ UN PRODOTTO PIÙ PROBABILE.
TROVIAMO UN’UNIONE PIÙ DIFFICILE TRA LE BASI AZOTATE, PERCIÒ UN PRODOTTO MENO PROBABILE.