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APOPTOSI 4 - Coggle Diagram

- - - - Quindi otteniamo il CITOCROMO C fluorescente
        
        E quando si libera da mitocondri e va nel citosol, lo vedi subito, perché invece di vedere la GFP-citocromo, dentro ai mitocondri, quindi tutti i puntini belli compattati nel citosol corrispondenti ai mitocondri, quando induci l'apoptosi, diventa un segnale GFP diffuso in tutto il citosol
        
        Come faccio?
        
        Costruisci questa proteina di fusione, con la GFP e il tuo gene, lo metti in un plasmide di espressione eucariotica, transfetti le cellule con questo plasmide, e così si esprime la proteina
        
        Poi sotto microscopio a fluorescenza farai le tue valutazioni
- - - - se tagliassero in maniera random, prima che mettano in piedi una quantità di caspasi giustamente attive
        
        Quindi seguono la stessa modalità di degradazione che utilizzano per attivarsi
        
        Però non era una domanda banale: hanno scoperto prima come funzionavano, poi dopo hanno capito come si attivavano
        
        Sono molto precise
        
        Possiamo mettere in piedi un sistema che segue la degradazione delle caspasi?
        
        che possa determinare se le caspasi sono attive o no
        
        allora sappiamo che le caspasi sono più piccole delle procaspasi perché perdono un pezzo all'N-terminale, per cui si fa un SDS-PAGE e poi un WESTERN BLOT, e quindi il lisato si trasferisce su un filtro.
        
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- - - - Grazie alle perforine
        
        Creano dei fori di membrana e permettono ai GRANZIME di entrare ed attivare le caspasi