Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
PCR - Coggle Diagram
PCR
TAQ polimerasi
no bozze
aggiunta Poli A
si cofattori
si errore
T alte e tempo basso
PFU polimerasi
si attività nucleasica
si bozze
estremità piatte
no errore
velocità maggiore
primer
formati da RNA
instabile
lunghezza 17 - 20
contenuto GC 40 - 60%
T annealing (alta)
T tra primer simile
fasi
appaiamento primer 50 - 60°C
amplificazione 72°C
denaturazione 94°C
polimerasi
optimun TAQ 72°C
non deve funzionare prima dell'optimum
tecniche
usare palline di cera
uso anticorpi
uso uridina trifosfato
mettere in ghiaccio
stampo PCR
parto: RNA (instabile)
converto in DNA complementare
tramite Rettrotrascrittasi
primer Oligo T
lega a poli A di RNA
trascrive
formazione eterodimero (DNA+RNA)
DNA (instabile, duplicato)
RNA (eliminato con RNAsi)
T di Melting
DNA doppio filamento
in singoli filamenti
stabile legame tra
primer
DNA stampo
T annealing
primer appaia DNA stampo
inferiore 3 - 5°C
alla T di Melting
amplifica un pezzo di DNA
utilizzo desossinucleotidi trifosfato
ideata da Mullis
semi quantitativa