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T32 MICRO: REPLICACION DE LOS VIRUS ANIMALES - Coggle Diagram
T32 MICRO: REPLICACION DE LOS VIRUS ANIMALES
Intro
Finalidad de la infección vírica: síntesis de ác nucleico vírico y cubierta del virus. Periodo extracel (fijacion/adsorcion) e intracel (penetracion en cél, replicacion, liberacion)
Replicacion de los virus animales: curva de crecimiento de un paso.
Periodo de
eclipse
: cuando el virion afecta una cél, desaparece un momento (esta formando y replicando material génet)
Periodo de
crecimiento exponencial
: liberacion al ext de los nuevos viriones.
Fijacion y penetracion
: cuando virus entra en contacto con la cél. En el int el virus pierde su envoltura y libera su material genético iniciando la
transcripcion
y la
replicacion
.
Sale
por lisis o por gemacion (no la rompe pero se lleva consigo parte de su mb plasmatica)
Fases de la multiplicacion virica intracel
1. Fijación/adsorción
: los viriones se unen a las céls por F. electroestáticas sin consumo de energía (colisiones aleatorias). Existen en la mb celular áreas de afinidad (receptores) para los viriones (especificidad):
• Los virus con envuelta poseen espículas (glicoproteínas).
• Los virus desnudos poseen fibras
• Receptores celulares: glicoproteínas.
2. Penetración y liberación (decapsidación)
: depende del tipo de virus y su duración es variable. La penetración y decapsidación ocurren a la vez o bien las cápsides son eliminadas una vez dentro. Tipos de entrada:
Endocitosis
(la + comun): virus contacta con la mb y esta se invagina => se prod una vesicula en el int de la cél. Si virus vestido, las 2 mb's se fusionan y se libera capside al cito. Si desnudo, una prot rompe la mb vesicular.
Fusion
: virus se fija a cél y forma parte de la mb plasm, solo la capside pasa al int celular
Entrada directa (translocacion)
: tipico de virus DESNUDOS. Virus se fija a mb y solo entra el genoma virico al int cél
3. Eclipse
o periodo de latencia
Es una fase invisible durante la replicacion virica y sintesis prots: separacion ac nucleico viral de cubierta proteica. La replicacion se prod en el cito o en el nucleo: varia segun tipo de virus, ADN o ARN, etc. ADN: ADN polimerasa (nucleo), ARN: ARN polimerasa (cito del virus)
2 fases:
• Elaboración de un ARNm precoz, que genere unas prots iniciales.
• Replicación del ác nucleico vírico y nuevo ARNm, que genere prots tardías o estructurales.
Replicacion segun virus:
Nucleo
: clase I, II, VI, VII
Citoplasma
: clase I, III, IV, V, VI, VII
4. Maduración
(ensamblaje de la cápside proteica): en nucleo o cito (a veces ext cél).
5. Liberación
: depende si el virus es envuelto o no:
Virus
envuelto
: incorporan a mb plasmatica prots viricas y forman yemas en zonas de la mb plasmatica => la cél NO muere.Virus adquieren su envoltura de la mb plasmatica y tb del RE o aparato de Golgi.
Virus
NO envuelto
: salen produciendo LISIS celular.
Mecanismos virales de evasion de la respuesta defensiva
1. Acumulación de mutaciones
(virus de ARN). Los virus de ARN son más simples e inestables. Su replicación corre a cargo de las ARN polimerasas: muy fácil que se produzcan errores y sin poder corregirlos (ADN polimerasa es capaz de corregir un error si se produce).
Antigenic drift
: mutación produce una modificación del virus, provocando que los Ac's dejen de reconocerlo.
Antigenic drift
: un animal ha sido infectado por dos virus diferentes y estos intercambian material genético (se modifica un ácido nucleico por incorporación del ácido nucleico del otro virus).
2. Infecciones latentes
. El virus se integra en el ADN de la cél y se queda ahí. Solo cuando el virus se active se producirá la enf
3. Neutralización de Ac's
. Prod de ++ viriones, bloqueando los Ac's. La respuesta es insuficiente para frenar el avance de los viriones.
4. Inactivación de citoquinas
. Las citoquinas son prots que permiten la comunicación entre las céls, excretadas durante los fenómenos de infección, atrayendo céls RI. Esta comunicación es a través de receptores => los virus prod susts parecidas a los receptores de las citoquinas, evitando la unión y la transmisión de la info.
5.
Infección de células del Si =>
inmunosupresión
.
6. Inhibición de la apoptosis, interferón.
Método de estudio de los virus
Crecimiento vírico
: aislamiento del virus, identificación, disponibilidad…
• En
animales vivos
: experimentos destinados a estudiar la respuesta del SI
•
En huevos embrionados
: económica y conveniente. Permiten detectar mortalidad embrionaria, daño tisular o formación de lesiones en mbs del huevo
• En
cultivos celulares
: conjunto de células desarrolladas en medios especiales y muy homogéneas. Permite detectar efectos citopaticos. Se emplean lineas celulares primarias o lineas celulares continuas.
Purificación
: caracterización, estudio físico - químico del virus, estructura…
• + gdes que las prots.
• Más estables que los componentes celulares.
• Presencia de prots de superficie.
Centrifugación diferencial y por gradiente de densidad.
Precipitación de virus.
Desnaturalización de contaminantes.
Digestión enzimática de constituyentes celulares.
Cuantificación vírica
(según propiedades biológicas del virus). Cálculo del n° de partículas y concentración de unidades infecciosas. Analisis formacion calvas similar a calculo UFC
Dosis letal 50
DL50: cuantifica efectos biologicos: cantidad de virus requerida pa matar 50% indvs infectados. Estudiado sobre céls en cultivo, embriones pollo o animales labo
Hemoadsorcion vírica
: [eritrocitos] sobre la mb plasmática de las céls infectadas por algunos virus: hay algunos virus con envuelta que expresan prots virales en la mb citoplasmática.
Método indirecto:
•
Hemoaglutinación
: capacidad de algunos virus libres para aglutinar los hematíes debido a la presencia de hemoaglutinina.
•
ELISA
: Ag's inmovilizados detectados mediante Ac's marcados con una ez que permite su detección.
Determinación de ácidos nucleicos: PCR a tiempo real
Otros métodos
para caracterización del virus: microscopio electrónico, sensibilidad a solventes lipídicos (virus envueltos), inhibidores de la síntesis de ADN, enzimas de restricción, secuenciación o detección de anticuerpos específicos (métodos inmunológicos).
Métodos gls de diagnostico de las infecciones por virus
Diagnostico
directo
Aislamiento
del virus y posterior identificación.
Sobre muestras patológicas:
•
Microscopía electrónica
(debe haber un mínimo de concentración viral), podemos observar la morfología y el tropismo. Confirma la presencia del virus.
•
Lesiones
, observadas con técnicas histopatológicas.
•
Detección de Ag's virales
: inmunofluorescencia directa (cortes en criotomo), técnicas inmunoenzimáticas (EIA, ELISA, RIA), métodos inmunocoloidales, técnicas inmunohistoquímicas.
Aislamiento
: en los animales de laboratorio, en huevo embrionario, en cultivos celulares.
Detección de
ácidos nucleicos
. Técnicas moleculares:
• Hibridación (uso de sondas radioactivas o fluorescentes).
• Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para virus ADN.
• PCR con transcriptasa inversa (RT PCR) para virus ARN.
Detección de productos de la PCR: detección del producto final, detección en tiempo real (PCR), secuenciación de ADN (genoma completo o genes).
Diagnostico
indirecto
: deteccion de Ac's especificos frente al virus. Técnicas inmunologicas: inmunoensayos basados en ez's (EIA y ELISA). Radio inmuno ensayos (RIA)
Inactivacion de los virus
Inactivación
= pérdida de la act biológica de las partículas víricas por exposición a diversos agentes físicos y químicos (=viricidas).
Por:
•
T
°: 55-60ºC (segundos), 37ºC (min), 20ºC (h), 4ºC (días), -70ºC (meses/años).
•
Radiaciones
: UV, rayos X, Gamma. Los virus monocatenarios son + sensibles q los bicatenarios.
•
Solventes
de lípidos: afectan solo a los virus envueltos (éter, cloroformo, sales biliares o detergentes aniónicos).
•
Desinfectantes
: formaldehído, ácido clorhídrico e hipoclorito sódico.
•
Colorantes
vitales: rojo neutro y naranja de acridina (inactivación por luz).
Los virus
peqs y desnudos
son + difíciles de matar que los virus gdes y envueltos.
Obj
vacunas
: prod Ac's y destruir la infectividad conservando la antigenicidad
Sustancias inhibidoras de la multiplicacion virica - antivirales
Antivirales
: susts utilizadas pal tratamiento de infecciones prod por virus que NO alteran la biología celular.
Clasificacion
: inhibidores de fusión y entrada, inhibidores de la decapsidación, inhibidores de la síntesis viral e inhibidores de la liberación.
Caracteristicas ideales
: act especifica frente al virus, inhibir un paso esencial de su replicacion, evitar desarrollo resistencias, alta biodisponibilidad, rapida penetracion, baja frecuencia de administracion y bajo coste.
Limitaciones
: uso prolongado, efectos secundarios y desarrollo de resistencias => NO muy empleado en los animales.
Interferencia virica
Mecanismos usados por las céls para evitar la reinfección por un virus. Ocurre por distintas razones:
• Inactivación de los receptores de la célula: cuando llega otro virus no tiene receptores a los que unirse.
• Modificaciones de enzimas o proteínas celulares o por ejemplo ocupar una enzima (mientras esté siendo utilizada no podrá ser usada por otro virus).
• Síntesis de sustancias protectoras: evita que la célula se vuelva a infectar o avisa a las células de alrededor de la infección.
• Generación de partículas interferentes defectuosas o mutantes.
Estos fenómenos tienen que ver con la interacción virus-cél pero NADA que ver con la RI, mientras que las sustancias que secrete la cél sí que tendrán que ver con el SI. Esta interferencia suele ser breve.
Interferon
Mecanismo de accion actividad antivirica
Interferon se produce cuando virus empieza a multiplicarse. El interferon se une a receptores especificos de la mb celular, y hara q la
cél inhiba al proximo virus
q se presente. Solo afecta a céls de alrededor.
Otros efectos del interferon
: inhiben multiplicacion céls tumorales y modulan la RI: INF-alfa e INF-beta estimulan fagocitosis. INF-gamma activa NK, Tc, macrofagos y granulocitos. Incrementan prod MHC I y MHC II
Esta sust impide la infección de la cél con nuevos virus, pero tb actúa como citoquina => afectara a la RI. Son específicos de un tipo de céls y están asociadas con la esp animal que los secreta.
Inductores
: virus e inductores no virales. Mayor inductor = cadena doble de ARN (NO existe en eucariotas)