Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
หลักการเลือก TAQMAN ASSAY - Coggle Diagram
หลักการเลือก TAQMAN ASSAY
Evalution
Conventional
Rungel electropholysis
Real-Time PCR
แปลผลออกมาเป็นตัวเลขเพื่อหา Quantification ได้
หา Standard curve
หา Absolute amplification
Digital PCR
เป็นวิธีแบบ Endpoint detection
ระบบ Detection
TaqMan (Fluorgenic 5' nuclease chemistry)
Design TaqMan Probes ให้มีความ Specific ของยีนที่เราสนใจ
High Specificity
Low Sentivity
Detection พร้อมกันหลายยีนได้
มึความแม่นยำสูง
SYBR
ไม่ต้อง Design Probes มีเพียง forword และ reword ก็สามารถทำ PCR ได้
High Specificity
Medium Specificity
Detection พร้อมกันหลายยีนไม่ได้
Real-Time PCR
Workflow for conventional PCR
Workflow for Real-Time PCR
One step ใช้ Template เป็น RNA
Reagent
Buffer
PCR enzyme
Primers
RT emzyme
Two step
สกัดสารเพื่อแปลง RNA ให้เป็น cDNA จะต้องเพิ่ม RNA Oligo หรือ Random primers
Tube ที่ 2
Primers
Enzyme polymerrase
PCR buffer
การเลือกใช้
One step
ไม่เก็บ cDNA
Taget ไม่เยอะ
ลดการ Contamination เพราะทำจบในหลอดเดียว
Two step
เก็บ cDNA ได้
cDNA สามารถศึกษาได้หลายครั้ง
การเลือกน้ำยา
SYBR Green
หลักการ
สารสีเขียวจับแบบ non-specific ที่ตำแหน่ง dsDNA เมื่อเกิดปฏิกิริยาแล้ว สารทีที่เข้าไปจับจะมีการเรืองแสง
เหมาะกับการ Screening ที่ไม่ได้มีความ specific สูงมาก
ใช้ระยะเวลานานในการดูผล non-speccific
มี 2 ชนิด
PowerTrack SYBR Green MasterMix
ใช้ได้หลากหลายอุณหภูมิ
ใช้ได้กับ
cDNA
DNA
RNA ที่ถูก convert แล้ว
มี Buffer และน้ำยา
RUN
Fast
Standard
PowerUp SYBR Green MasterMix
One Tube Mastermmix
ใช้ได้กับ
DNA
cDNA
RNA ที่ถูก convert แล้ว
ไม่มีสีมาให้
RUN
Standard
Fast
TaqMan
TaqMan Fast Advonced MasterMix
1 step : TaqMan Fast Virus 1-step Master Mix
รองรับระบบ Fast และ ระบบ Standard
มีความ Sensitivity สูง
ใช้กับ RNA,Virus ที่เป็น DNA
ใช้ในงสน singleplex,Multiplex,exogenus หรือ endogenus internal controls ได้
2 step : TagMan Fast Advonced Master Mix
Run Reaction ได้ใน 40 นาที
ถูก Optimize ให้ใช้งานร่วมกับ Multiplexing
ใช้งานร่วมกับ Probes
รองรับ DNA