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LA BIOLOGIE SYNTHETIQUE - - Coggle Diagram
LA BIOLOGIE SYNTHETIQUE -
DEFINITION ?
INGENIERIE GENETIQUE /
US = Ensemble des techniques utilisants les ADN recombinants ou synthétiques dans l'intention de créer ou d'altérer un génome
Universel = applicable à tous les êtres vivants :MO/plantes/etres humains
Techniques ?
Historique : Evolution suite aux innovations technologiques ! : hybridation/mutagénèse aléatoire/ transgenese/ édition du génome
image
1-Mutagénèse
Induite
augmentation du taux de mutations (x500) / agents physiques (UV ) ou chimiques (agent alkylant/
spontanee
peu d'évenement
2- Outils de transgénèse : transfert d'éléments génétiques provenant d'un organisme étranger au génome
Transformation
ADN plasmidique le + souvent
Chimique = bactéries rendues compétentes - au froid les membranes + 42°C-choc thermique +CaCl2 = déstabilisation de la membrane = pénétration de l'ADN
Electroporation :application d'un champ électrique ++ efficacité de transfo - lavage au préalable des cellules pour éliminer les sels- choix en phase expo de croissance
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Transfection cellules eucaryotes, particulièrement animale
2 types
transitoire :reste dans le cytoplasme et n'est pas intégré au génome (pas transmis à la descendance) = permet un haut niveau d'expression dans la cellule transfectée/ plus efficace si ADN surenroulé -meileuure pénétration cellulaire + siRNAs, miRNAs, mRNAs
stable = intégration au génome ou maintien ou sous forme de plasmide- plusieurs générations = prot recombinante / ou déterminer un effet à long terme sur la cellule.
peu d'évenement d'intégration = système de sélection efficace / résistance à un antiobio/ compensation d'un manquant.= ce qui peut aussi induire un changement morphologique des cellules :CI127 cells transfected with vectors derived from bovine papilloma virus produce a morphological change
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Facteurs influençant la transfection : nature de la lignée cellulaire/viabilité, cellules en culture / nombre de passage cellulaire/conditions de culture cellulaire (confluence (70 à 90 % )= 5 × 105 to 2 × 106 cells/mL)/ ne pas être en phase stationnaire/densité de cellules trop élevée -/coating cellulaires (attacher les cellules)/++ sérum dans le milieu de culture/présence d'atb/topologie et la taille des ADN plasmidique/
chimique - enrobage avec des lipides cationiques (DEAE dextran)/
Physique : Electroporation / *Biologique : utilisation de virus génétiquement modifié
Transfection : ADN/ARNm/SiARN
3-Edition du genome = modification du génome par addition/substitution/suppression ciblées d'une ou de plusieurs base d'aDN dans le génome : modif de séquences codantes//oiu non codantes
sous groupe de technique New GenomiqueTechniques NGT
CRISPR-CAS
Clustered Regularly Interspaced Short
Palindromic Repeats-associated
including zinc-finger nucleases (ZFNs
Transcription activator–like effector nucleases (TALENs)