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DIAGNOSI VIROLOGICA - Coggle Diagram

- - - - RICERCA dell'ANTIGENE VIRALE
        
        la ricerca degli antigeni si effettua tramite tecniche di immunofluorescenza indiretta
        
        queste prevedono l'uso di:
        
        anticorpi monoclonali
        
        anticorpi policlonali
        
        servono per verificare la presenza di determinati antigeni per cui sono specifici
        
        Lez 10 pag 2
        
        IMMUNOFLUERESCENZA DIRETTA
        
        reaz di agglutinazione
        
        l'antigene virale reagisce con gli anticorpi
        
        generando una reaz di precipitazione
        
        tuttavia questa reaz può essere detta di agglutinazione perchè l'anticorpo o l'antigene vengono legati a particelle di lattice
        
        in modo tale che poi nell'agglutinazione ad essere visibili sono le part di lattice e non gli Ab o gli antigeni virali
        
        REAZ di PRECIPITAZIONE
        
        Lez 10 pag 2
        
        si basa sulla reazione tra un antigene virale e il rispettivo anticorpo
        
        uno di questi due comp deve essere legato ad un enzima, il quale rappresenta il sistema rilevatore
        
        ovvero tale enzima in presenza del proprio substrato naturale sviluppa un colore
        
        dunque il colore è un indicatore della reaz
        → se è presente allora la reaz è avvenuta
        
        TECNICA di
        IMMUNO-ENZIMATICA
        
        nel tempo la tecnica di immuno-enzimatica è stata sosituita con la tecnica di chemioluminescenza
        
        in questo caso il sist rilevatore è rappresentatp da una sost chimica
        
        la quale in presenza del suo fisiologico substrato emette luce
        
        tale tecnca si è rivelata essere:
        
        molto rapida
        
        molto sensibile
        
        2 more items...
      - DIAGNOSI SIEROLOGICA
        
        SIERODIAGNOSI
        
        consiste nella ricerca di anticorpi sierici
        
        DEFINIZIONE
        
        SLIDE 10 pag 4
        
        - ricerca di IgG e IgM
        
        test qualitativo
        
        si tratta di un test che permette di stabilire la sola presenza o assenza di questi anticorpi
        
        non fornisce dunque alcuna informazione riguardo la quanità di Ab presente
        
        Lez 10 pag 4
        
        test quantitativo
        
        permette di stabilire la quantità di anticorpi presente
        
        tale tipologia di test è utile per valutare la risposta di un sogg ad un vaccino
        
        immunità
        
        infatti per essere considerati immuni è necessario essere dotati di almeno 10milliU int/mL di sangue di anticorpi specifici per un antigene di superficie
        
        ⚠️
        
        per rendere un test che è qualitativo un test quantitativo si deve utilizzare una macchina e dei calibratori a concentrazione nota
        
        1 more item...
        
        Quando è utile ❓
        
        l’insorgenza della sintomatologia clinica è coincidente con la produzione di anticorpi sierici
        → HAV, virus della rosolia
        
        la ricerca di IgM o un incremento del titolo di IgG nel siero del paziente indica una malattia in fase acuta
        
        i virus causano una malattia clinica mesi o anni dopo la sieroconversione
        → HIV o virus della rabbia
        
        E' UTILE SE ... ✅
        
        SLIDE 10 pag 45
        
        i virus causano una malattia clinica prima della comparsa di anticorpi
        
        pazienti immunodepressi
        
        virus responsabili di infezioni latenti
        → la riattivaz di HSV non causa una sostenuta risposta umorale
        
        NON E' UTILE SE ... ❌
        
        SLIDE 10 pag 48
    - - consiste nella valutazione della presenza del virus nel materiale clinico mediante:
        
        RICERCA del GENOMA VIRALE
        
        metodica quantitativa
        
        tale tecnica permette di verificare la presenza del materiale genetico e quantificarne la quantità
        
        il genoma virale amplificato con la PCR può essere utilizzato per:
        
        Lez 10 pag 3
        
        PCR
        
        studio dei genotipi
        
        tale test permette di studiare i diversi genotipi, di uno stesso virus, che si distribuiscono nelle varie aree geografiche
        
        procedimento
        
        si fa una reaz di ibridazione con il DNA amplificato dalla PCR
        
        si inseriscono sonde specifiche per i diversi genotipi
        
        quella che si lega dimostra la presenza del genotipo per cui è specifica nel campione
        
        ogni sonda è legata a biotina e per questo genera bande colorate nel momento in cui si lega
        
        TEST di GENOTIPIZZAZIONE
        
        es: HIV
        
        è possibile adottare questo test per rilevare il co-recettore sfruttato da HIV
        
        e intraprandere così la terapia specifica
        
        evoluzione della diagnosi
        
        oggigiorno i metodi di diagnosi si sono evoluti e basta qualche ora per avere il quadro completo dei possibili microrganismi e agenti eziologici riferibili a quel quadro clinico
        
        si tratta di macchine in cui viene inserito il campione biologico (es. il liquor) e in questo si ricerca:
        
        antigeni virali
        
        genoma virale
        
        2 more items...
        
        Lez 10 pag 3
        
        ANALISI del CAMPIONE BIOLOGICO
        
        la scelta del campione biologico deve essere accurata e funzionale
        
        consegue da una attenta anamnesi del paziente
        
        SCELTA del CAMPIONE
        
        esempio
        virus dell'epatite A
        
        OSSERVAZIONE MICROSCOPICA
        
        tale metodo presenta:
        
        vantaggi
        
        individua morfologia
        
        svantaggi
        
        mancanza di personale esperto
        
        attrezzatura costosa
        
        incapacaità di discriminare virus con stessa morfologia
        
        poco sensibile
        
        solitamente è poco utilizzata perchè è poco sensibile
        
        posso dunque osservare il virus e rilevarne la morfologia
        
        ma non sarò in grado di individuarlo
        
        Lez 10 pag 1
        
        es = famiglia FS viridae
        
        si tratta di una famiglia composta da 7 patogeni diversi
        
        la cui morfologia è identica ma il ruolo patogeno completamente differente
        
        tramite osservazione microscopica sarei in grado di individuare la famigli ma NON nello specifico di quale patogeno si tratta
        
        osservazione di:
        
        tessuti autoptici e bioptici
        
        campioni biologici
        
        POCO SENSIBILE
        
        SLIDE 10 pag 12
        
        DEFINIZIONE
        
        ESAME COLTURALE
        
        tale tecnica presenta:
        
        vantaggi
        → consente di disporre del ceppo virale per eventuali analisi aggiuntive
        
        svantaggi
        
        procedimento diagnostico lento e costoso
        
        necessità di disporre di colture cellulari
        
        difficoltà di alcuni virus a replicarsi in vitro
        
        ISOLAMENTO VIRALE
        
        HerpesVirus
        → causa formazione di sincizi o arrotondamento
        
        PicornaVirus
        → causa arrotondamento e lisi
        
        ParamyxoVirus
        → causa la formazione di sincizi
        
        EFFETTI CITOPATICI in COLTURE CELL in VITRO