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IL SEQUENZIAMENTO - Coggle Diagram
IL SEQUENZIAMENTO
INTRO
L’ANALISI DELLA SEQUENZA È UTILE ANCHE PER INDIVIDUARE MUTAZIONI O PER STABILIRE CORRELAZIONI FILOGENETICHE TRA SPECIE DIVERSE.
ANCHE SE IL CONCETTO DI SEQUENZIAMENTO SI RIFERISCE, SPESSO IN MODO IMPLICITO, AL DNA (O, IN CASI PIÙ LIMITATI,ALL’RNA),
NON BISOGNA DIMENTICARE CHE LA PRIMA BIOMOLECOLA AD ESSERE SEQUENZIATA È STATA UNA PROTEINA, OVVERO L’INSULINA.
IL SEQUENZIAMENTO DEL DNA RAPPRESENTA IL PRIMO PASSO PER COMPRENDERE LA FUNZIONE DI UN GENE E, INASSOCIAZIONE CON ALTRE INDAGINI DI BIOLOGIA MOLECOLARE,
AIUTA I RICERCATORI A IDENTIFICARE, X ES, LE REGIONI REGOLATRICI DA QUELLE CODIFICANTI.
NEL CASO DEL DNA, IL SEQUENZIAMENTO PERMETTE DI RICOSTRUIRE L’ORDINE DEI NUCLEOTIDI (A, C, G E T) CHE FORMANO UNA MOLECOLA DI ACIDODESOSSIRIBONUCLEICO.
SEQUENZIARE UNA PROTEINA SIGNIFICA RICOSTRUIRE L’ORDINE PRECISO DEGLI AMMINOACIDI COSÌ COME SONO DISPOSTI NELLA STRUTTURA PRIMARIA.
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METODO SANGER:
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X SEQUENZIARE UN FRAMMENTO DI DNA (FILAMENTO STAMPO) IL METODO SANGER SFRUTTA LA CAPACITÀ DELLA DNA POLIMERASI DI COPIARE LA SEQUENZA
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UNA VOLTA INCORPORATI NELLA CATENA NASCENTE DI DNA, I DDNTP CAUSANO L’INTERRUZIONE DELLA SINTESI.
AL PROCEDERE DELLA REAZIONE, VENGONO INCORPORATI NEL NUOVO FILAMENTO
SIA DNTP NORMALI,CHE PERMETTONO ALLA REAZIONE DI PROSEGUIRE, SIA DDNTP CHE BLOCCANO LA SINTESI:
AL TERMINE DELLA REAZIONE, SI AVRÀ UNA MISCELA DI FILAMENTI CON LUNGHEZZA DIVERSA, A SECONDA DI DOVE È AVVENUTO L’INSERIMENTO DEL DDNTP TERMINATORE DI CATENA.
LA RIVOLUZIONE INTRODOTTA NEL METODO DI SANGER SI BASA SULL’IMPIEGO DEI NUCLEOTIDI TERMINATORI DI CATENA, OVVERO DIDESOSSINUCLEOTIDI (DDNTP):
RISPETTO AI NUCLEOTIDI USATI DALLE CELLULE PER LA SINTESI DEL DNA, I DDNTP SONO PRIVI DEL GRUPPO 3’-OH DELLO ZUCCHERO,
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TUTTAVIA, SI TRATTA DI UN METODO CHE RICHIEDE TEMPO E LAVORO E CHE NON È ADATTO AD APPLICAZIONI DI SEQUENZIAMENTO AD ALTA PRODUTTIVITÀ.
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IL SEQUENZIAMENTO SANGER È STATO DETERMINANTE X MOLTE IMPORTANTI SCOPERTE NEL CAMPO DELLA GENETICA,
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NEL 1977, SANGER SVILUPPÒ IL 1° METODO DI SEQUENZIAMENTO DEL DNA,
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