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IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO - Coggle Diagram
IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO
PRINCÍPIO
Micropartículas/células que são insolúveis em suspensão
As micropartículas pode conter tanto Ag como Ac, depende do que será detectado
No caso das células, geralmente, a pesquisa vai ser de antígenos naturais, que já estão naturalmente presentes naquelas células, ou pode ser que esses antígenos sejam adsorvidos de uma forma artificial no meio dos kits
Ex: algumas hemácias adsorvidas com um Ag ou Ac diferente
Vantagem
: quando a aglutinação é +, é possível ver a formação de agregados a olho nu, sem necessidade de microscópio, substância reveladora ou sub. sinalizadora
Os agregados são complexos de antígenos e anticorpos
AGLUTINAÇÃO INDIRETA
Reação +
ocorre a formação de complexos que são possíveis de ver a olho nú
Reação -
a solução fica homogênea, sem grumos, sem aglutinações presente na placa
Existe vários tipos de micropartículas de materiais diferentes
Gelatina
Carvão
Látex (poliestireno)
Hemácias formolizadas (modificadas)
hemácias alteradas com outros Ags ou Acs adsorvidos (não são as mesmas da aglutinação direta)
O branco é por causa do látex
O fundo preto facilita a visualização da aglutinação
Utiliza partículas inertes que vão ser adsorvidas com antígenos ou anticorpos (sistema artificial)
Existe uma variação da aglutinação indireta
MICROAGLUTINAÇÃO
A formação de imunocomplexos é vista em meio liquído
Pode utilizar hemácias formolizadas ou micropartículas de gelatina
Essas reações ocorrem em placas, estas podem ter o fundo em "U" ou em "V"
Hemaglutinação indireta
O Ag. não faz parte naturalmente da célula
No kit, vem adicionado/adsorvidos Ags nas hemácias de aves ou outros mamíferos que foram formolizadas, passaram por um processo industrial e foram modificadas,por isso é considerada uma técnica indireta
São utilizadas para detecção de Acs, principalmente de:
T. cruzi
T. gondii
T. pallidum
Amostra reagente
Formação de uma malha (poçinho quase todo preenchido)/ imunocomplexos, as hemácias não vão sedimentar no fundo do poçinho. Indica presença dos Acs pesquisados
Amostra não reagente
Se o pcte não tem os Acs não ocorre a formação de imunocomplexos, a malha não é formada, as hemácias vão sedimentar indicando reação negativa (formação de botão no fundo do poço)
As hemácias mais utilizadas são as hemácias de aves pq elas tem núcleo, o núcleo deixa as hemácias mais pesadas e elas sendimentam mais rapidamente pro interior do poçinho em U ou V
Exemplo:
PCR, ASLO, Fator reumatóide
AGLUTINAÇÃO DIRETA
O reagente são anticorpos contra o antígeno que está presente na célula
Exemplos
Sorotipagem de bactérias
essas bacs tem Ags presentes em sua superfície, o reagente contém Acs monoclonais/policlonais contra esses Ags das bactérias
Pesquisa de crioaglutininas
Tipagem sanguínea/Hemaglutinação direta
é um tipo de imunoensaio que utiliza a aglutinação direta pq na MB das hemácias tem vários Ags ali presentes (mols de superfícies)
Usa a presença dos Antígenos que faz parte naturalmente da célula
exite uma variação da aglutinação direta
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO DIRETA
Quando
não ocorre aglutinação
o teste é
positivo
Esse princípio é utilizado pq alguns antígenos virais aglutinam espontaneamente as hemácias.
Ex: vírus da rubéola, sarampo, influenza, enterovírus e etc.
Quando
ocorre aglutinação
o teste é
negativo
Pesquisa de anticorpos que estão inibindo a glutinação no teste in vitro
COOMBS
Utiliza reações de aglutinação
Direto/Teste de anti-globulina direta
Os Acs se ligam na MB da hemácias vão opsonizar essa hemácia, detecta se realmente tem ou não presença desses Acs ou do sistema complemento ligado na superfície dessas hemácias
É utilizado soro de Coombs-> contém Acs contra imunoglobulina humana (Anti- Ig humana)
Amostra: hemácias do paciente
Se der reagente/aglutinou-> quer dizer que tinham Acs ligados in vivo ali na MB das hemácias
O soro de coombs revela essa ligação de Acs nas hemácias do pcte
Serve para detectar nas hemácias do pcte se tem presentes ali Acs ligados
Indireto/Pesquisa de Acs irregulares (PAI)
Utiliza hemácias com determinados Ags conhecidos presentes na MB
É incubada as hemácias com os Acs presentes no soro do pcte, pode utilizar plasma tbm,depois coloca o soro de coombs
Simula os Acs ligando nas hemácias e depois para detectar essa ligação é utilizado o soro de coombs
Reação +
Aglutinação
O pcte tinha Acs presentes no soro/plasma
Depois precisa fazer a identificação do Ac irregular
Aparece muito em pctes politransfundidos ou mulheres que tiveram vários filhos
Amostra: soro do pcte
Pesquisa de Acs no soro do pcte
Existe uma variação da metodologia de aglutinação conhecida como:
FLOCULAÇÃO
Principío da técnica de VDRL
Teste não treponêmico
Detecta Acs que são prod. na infec., mas q não são específicos para o T. pallidum
Triagem para Sífilis
Não utiliza plasma
Pesquisa de
anticorpos anticardiolipina
(IgG, IgA, IgM)
Variante da aglutinação indireta -> utiliza um sistema para detectar Acs
O reagente, suspensão antigênica alcóolica composta por cristais de colesterol, cardiolipina e lecitina, coloca essa suspensão em contato com o soro do pcte
Não é uma aglutinação propriamente dita
Placa de Kline (escavada)
Soro do pcte + suspensão antigênica, caso haja a presença de Acs anticardiolipina ocorre a formação de floculação