Micropartículas contendo antígenos ou anticorpos adsorvidos → adição da amostra contendo o antígeno/anticorpo de interesse (peptídeos, hormônios, proteínas,...) → incubação e lavagem → adição de anticorpo conjugado com éster de acridina (molécula luminescente), que ligará ao analito → incubação e lavagem → adição do peróxido de hirogênio, tornando o meio ácido (pré-trigger); ele dissocia o éster de acridina do anticorpo → adição do hidróxido de sódio, tornando o meio alcalino (trigger) → luminescência