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TECNICHE MOLECOLARI E APPLICAZIONI IN PATOLOGIA CLINICA 1 - Coggle Diagram
TECNICHE MOLECOLARI E APPLICAZIONI IN PATOLOGIA CLINICA 1
PURIFICAZIONE ACIDI NUCLEICI
I PASSI PRINCIPALI DELLA PURIFICAZIONE DEGLI ACIDI NUCLEICI SONO
1.
ROMPERE LA PARETE E/O LA MEMBRANA CELLULARE
2.
ALLONTANAMENTO DELLE MEMBRANE
3.
SEPARARE GLI ACIDI NUCLEICI DAGLI ALTRI COMPONENTI CELLULARI (LIPIDI, PROTEINE E CARBODIDRATI)
4.
SEPARARE GLI ACIDI NUCLEICI TRA LORO (PER ES. IL DNA DALL’RNA)
5.
PRECIPITAZIONE ALCOOLICA E PURIFICAZIONE
6.
DOSAGGIO.
I PROTOCOLLI SPERIMENTALI VARIANO A SECONDA
DEL MATERIALE DI PARTENZA, DEL TIPO DI ACIDO NUCLEICO CHE SI VUOLE SEPARARE, DEL TIPO DI ESPERIMENTO CHE SI DEVE EFFETTUARE.
SANGER
ANALISI DEL GEL E DETERMINAZONE DELLA SEQUENZA DI DNA
MENTRE LA PCR SI USA X AMPLIFICARE IL DNA NELLA SUA INTEREZZA,
NEL SEQUENZIAMWNTO SECONDO SANGER, LO SCOPO E' GENERARE OLIGONUCLEOTIDI DI TUTTE LE LUNGHEZZE POSSIBILI, DALLA + CORTA FINO A QUELLA + LUNGA E COMPLETA DEL DNA TARGET
I PASSAGGI FONDAMENTALI DI QUESTO METODO SONO 3:
IL METODO PRENDE IL NOME DAL SUO IDEATORE, 2 VOLTE PREMIO NOBEL, CHE LO SVILUPPO' INSIEME AI SUOI COLLEGHI NEL 1977
ELETTROFORESI SU GEL X LA SEPARAZONE SU BASE DIMENSIONALE
SEQUENZA DI DNA DA SOTTOPORRE A PCR CON TERMINAZIONE DELLA CATENA
IL SEQUENZIAMENTO SECONDO SANGER, DETTO ANCHE METODO DI TERMINAZIONE DELLA CATENA,
E' UNA TECNICA CHE PERMETTE DI DETERMINARE LA SEQUENZA NUCLEOTIDICA DI UN DNA
ANALISI DELL'ESPRESSIONE GENICA
MOLTI ESPERIMENTI DI QUESTO TIPO MISURANO UN INTERO GENOMA SIMULTANEAMENTE.
LA SUPERSAGE È MOLTO ACCURATA E PUÒ MISURARE OGNI GENE ATTIVO, NON SOLO UN GRUPPO PREDEFINITO.
QUESTI PROFILI POSSONO, PER ES, DISTINGUERE TRA CELLULE CHE SONO IN PROLIFERAZIONE,
O MOSTRARE COME LE CELLULE REAGISCONO AD UN PARTICOLARE TRATTAMENTO.
LA TECNOLOGIA DNA MICROARRAY MISURA L'ATTIVITÀ RELATIVA DEI GENI TARGET IDENTIFICATI PRECEDENTEMENTE.
NEL CAMPO DELLA BIOLOGIA MOLECOLARE, GENE EXPRESSION PROFILING (TRADOTTO COME ANALISI DI ESPRESSIONE GENICA)
È LA MISURA DELL'ATTIVITÀ (L'ESPRESSIONE) DI MIGLIAIA DI GENI ALLA VOLTA, PER CREARE UN'IMMAGINE GLOBALE DELLA FUNZIONE CELLULARE.
ANCHE TECNICHE BASATE SULLA SEQUENZA, COME LA SERIAL ANALYSIS OF GENE EXPRESSION (ANALISI SERIALE DI ESPRESSIONE GENICA E ABBREVIATA COME SAGE OPPURE SUPERSAGE) SONO USATE PER LA GENE EXPRESSION PROFILING.