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TAGLIARE IL DNA: GLI ENZIMI DI RESTRIZIONE/SEPARARE IL DNA:…
TAGLIARE IL DNA: GLI ENZIMI DI RESTRIZIONE/SEPARARE IL DNA: L’ELETTROFORESI
GLI ENZIMI DI RESTRIZIONE SONO ENDONUCLEASI CHE ROMPONO IN MODO PRECISO IL LEGAME FOSFODIESTERE TRA DUE NUCLEOTIDI ADIACENTI.
SONO ENZIMI SCOPERTI NEI BATTERI,.
CHE LI USANO PER FRAMMENTARE E INATTIVARE IL DNA DEI FAGI CHE LI INFETTANO.
GLI ENZIMI DI RESTRIZIONE TAGLIANO LA DOPPIA ELICA DEL DNA IN CORRISPONDENZA DI SEQUENZE DI NUCLEOTIDICHE SPECIFICHE CHIAMATE SEQUENZE DI
TAGLIO,
QUINDI OGNI ENZIMA RICONOSCE UNA SPECIFICA SEQUENZA DI TAGLIO CHE È PALINDROMICA OVVERO CHE PUÒ ESSERE LETTA IN ENTRAMBE LE DIREZIONI
. IL TAGLIO PUÒ TRA L’ALTRO AVVENIRE NELLO STESSO PUNTO SUI DUE FILAMENTI DI DNA
PRODUCENDO ESTREMITÀ PIATTE OPPURE PUÒ ESSERE SFALSATO DI QUALCHE NUCLEOTIDE PRODUCENDO ESTREMITÀ COESIVE A SINGOLO FILAMENTO.
PER CONTROLLARE LA DIMENSIONE DI UNA MOLECOLA DI DNA È L’ELETTROFORESI SU GEL D’AGAROSIO
, UNA TECNICA ANALITICA CHE PERMETTE DI SEPARARE I FRAMMENTI DI DNA IN BASE ALLE LORO DIMENSIONI.
LE MOLECOLE DI DNA SONO CARICHE NEGATIVAMENTE PER LA PRESENZA DI GRUPPI FOSFATO DELLO SCHELETRO CARBONIOSO,
POI QUANDO I FRAMMENTI DI ACIDI NUCLEICI VENGONO SOTTOPOSTI AD UN CAMPO ELETTRICO SI SPOSTANO VERSO IL POLO POSITIVO.
POI QUANDO I FRAMMENTI DI ACIDI NUCLEICI VENGONO SOTTOPOSTI AD UN CAMPO ELETTRICO SI SPOSTANO VERSO IL POLO POSITIVO.
OVVERO UN POLISACCARIDE CHE È CARATTERIZZATO DA UNITÀ RIPETUTE DI D-GALATTOSIO E 3,6-ANIDRO-L-GALATTOPI-RANIOSO
. QUESTI VENGONO RISCALDATI FINO ALLA FUSIONE,
, MA UNA VOLTA RAFFREDDATE LE MISCELE DIVENTANO GEL,
LE MISCELE FUSE DI AGAROSIO VENGONO COLATE IN STAMPI
IN CUI A UN’ESTREMITÀ È POSIZIONATO UN PETTINE DI PLASTICA
CHE VIENE RIMOSSO NEL MOMENTO IN CUI IL GEL SI SOLIDIFICA,
, LASCIANDO COSÌ DEI POZZETTI NEI QUALI VENGONO CARICATI I CAMPIONI DI DNA DA ANALIZZARE.
IL GEL POI VIENE IMMERSO ORIZZONTALMENTE IN UNA SOLUZIONE TAMPONE ALL’INTERNO DI UNA CAMERA ELETTROFORETICA,
IN CUI SI GENERA UN CAMPO ELETTRICO.
LA STRUTTURA DI GEL DI AGAROSIO SI COMPORTA COME UN SETACCIO,
COSICCHÈ LE MOLECOLE DI DNA PIÙ CORTE SI SPOSTANO PIÙ VELOCEMENTE E QUELLE PIÙ LUNGHE PIÙ LENTAMENTE.
AL TERMINE DELLA CORSA ELETTROFORETICA È POSSIBILE VISUALIZZARE I FRAMMENTI
SOTTO FORMA DI BANDE GRAZIE A MOLECOLE CHE SI LEGANO AL DNA,
, DEDURRE LA LORO DIMENSIONE TRAMITE IL CONFRONTO CON ALTRE MOLECOLE DI DNA DI LUNGHEZZA NOTA
E INFINE RECUPERARE I FRAMMENTI CHE CI POTREBBERO SERVIRE PER ALTRI ESPERIMENTI.