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Ingeniería genética, marcador:, tecnología del ADN recombinante,…
Ingeniería genética
HERRAMIENTAS
materias primas
ADN / ARNm
oligonucleótidos
desoxinucleótidos trifosfato
enzimas
nucleasas
endonucleasas
de restricción / restrictasas
Eco I
extremos pegajosos / cohesivos
escisión lugares separados
C + TTAAG
Hae III
extremos romos
escición mitad
CTT + GGA
Cas 9
ligasa
ARN primasa
ADN polimerasa
transcriptasa inversa
célula huesped
características
fácil manipulación
fácil multiplicación en
condiciones del laboratorio
cumplir características producto
ejemplos
eucariotas
Cándida albicans
Saccharomyces cerevisiae
procariotas
Escherichia coli
Bacillus subtilis
vector
características
pequeños
fácil multiplicación laboratorio
ORI
marcador de selección
gen con función indicadora
secuencia diana
ejemplos
eucariotas
virus
procariotas
plasmodesmos
cósmidos
bacteriófagos
TÉCNICAS
PCR
reacción en cadena de la polimerasa
elementos
ADN / ARN
cebadores
enzimas
ADN polimerasa
ligasa
d
N
TP
multiplicar millones de veces secuencias ADN
proceso
desnaturalización (95ºC)
unión cebadores (50ºC)
elongación cadena (72ºC)
secuenciación ADN
método de Sanger
elementos
enzimas
ligasa
ADN polimerasa
dd
R
TP
didesoxiribonucleótido trifosfato
muchas copias ADN
cebadores
obtener orden bases nitrogenadas
proceso
desnaturalización (95ºC)
unión cebadores (50ºC)
elongación cadena con dd
R
TP
métodos
fluorescencia
gel
poliacrilamida
detector fluorescencia
espectograma
electroforesis
(4 mezclas con cada ddRTP)
gel
campo eléctrico --> desplazamiento
según su tamaño
cortos --> corren, más lejos
largos --> despacio, más cerca
clonación molecular
proceso
seleccionar vector +
ARNm (con gen)
PCR
obtención de ADNc
cebador (cola poli T)
transcriptasa inversa
aislamiento + purificación
endonucleasa
(romper lazo)
Dis. NaOH --> hidrólisis
juntar vectores +
células huesped
ADN + vector
= ADN recombinante
x unión extremos cohesivos
antibióticos
(X gal)
hibridación colonias
a filtro de nitrocelulosa
sonda radioactiva
incubación --> híbrido
lavar filtro
película rayos X
comparación + obtención
producción
restrictasa
elementos
ARNm
célula huesped
enzimas
transcriptasa inversa
restrictasa
endonucleasa
vector
cebador (cola poli T)
filtro de nitrocelulosa
dis NaOH
película rayos X
sonda ADN radioactivo
CRISPR-Cas9
rama biología,
modificar / transferir genes
org --> otro
productos para humanos
marcador:
isotópico
fluorescencia
tecnología del ADN recombinante
**secuencia diana:
palindrómica (Ej. CTTAAG)