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Capítulo 1: Métodos de estudio en Histología - Coggle Diagram
Capítulo 1: Métodos de estudio en Histología
Preparación de cortes histológicos
Microscopio óptico
(de luz o fotónico)
La imagen se forma a través de un
haz luminoso
que atraviesa el tejido, y posibilita ver su contenido. En tejidos muy finos y sin mayor densidad, es posible observar muy fácil. En la mayoría de tejidos, es necesario seleccionar los mejores y cortes más delgados posibles. Se obtienen de un
microtomo
.
Formas de obtención del tejido
Biopsia
Obtención de una muestra de tejido para su posterior análisis para diagnóstico patológico/oncológico.
Necropsia/autopsia
Fijación
Necesaria para evitar
autólisis
y digestión por parte de bacterias u otros patógenos.
Fijación química
Se sumerge tejido en sust. que estabilizan y forman enlaces con el tejido. Se debe cortar el tejido. El más común:
(formol al 10%)
El
formol
es una solución acuosa del gas
formaldehido
en proporción 40 partes gas/60 partes agua.
En lab: 1 parte formol/9 partes agua. (se obtiene formol al 10%)
, y eso tiene
4% de formaldehido.
En cambio, en microscopio electrónico, se usa una doble fijación. Muestra en glutaraldehido + amortiguador, luego 2da fijación tetraóxido de osmio, y amortiguador.
Fijación física
Con criostato/criotomicrotomo
A nivel hospitalario (procedimientos quirúrgicos)
enzimas y proteínas e pueden ver, nivel histoquímico.
Inclusión
Inclusión de resinas plásticas ( microscopia óptica y electrónica) y parafina (microscopia óptica). en casettes se sumergen en parafina
Inclusión/imbibición de parafina
previo: deshidratación y aclaramiento
extraer agua de tejidos, a través de baños de solución de concentraciones crecientes de etanol (
from
etanol 70% en agua to etanol al 100% de concentración).
Luego se usa solvente orgánico más parafina o resina plástica.
Sustancias intermediarias:
xileno o tolueno
Luego se pone parafina a 56-60 grados centígrados.
Aclaramiento:
se vuelve hidrófoba (impermeable). Con xileno y tolueno
Coloración
Tejidos suelen ser incoloros
Básicos
Azul de toluidina, azul de metileno y hematoxilina
Ácidos
Naranja G, fuscina ácida y eosina (tiñen mitocondrias, vesículas de secreción, proteínas y colágeno).
Microscopía de contraste de fase y contraste diferencial de interferencia
Microscopia de contraste de fase:
Integrados con sistema de lentes que permiten ver a orgánulos/tejidos que se verían casi transparentes.
Microscopia de contraste diferencial ( microscopia interferencial de Nomarski)
Produce una imagen tridimensional del tejido en cuestión.
Microscopía óptica
Sistema óptico
condensador
Concentra la luz de la lámpara y la proyecta como haz de luz sobre la muestra
objetivo
recibe la luz que atravesó la muestra y proyecta una imagen aumentada de la muestra en dirección al ocular
oculares
Amplía la imagen y la lleva hasta la retina, o pantalla, cámara fotográfica o detector electrónico.
En el caso de imágenes proyectadas a la retina, para calcular la ampliación total se usa: AT: Aumento del objetivo por el aumento del ocular.
A.T= AuOc
AuOb. *
Sistema lumínico
Sistema mecánico
Microscopía electrónica
De Transmisión
Límite de transmisión:
0,1-3 nm
Con cañón de electrones
De barrido
Imágenes pseudotridimensionales de los tejidos
Resolución
Es la mínima distancia que debe existir entre 2 puntos o líneas para que un sistema óptico los distinga (los identifique como 2 objetos separados).
El límite de resolución de microscopio fotónico es de
0,2 μm
Microscopía de fluorescencia
Emite luz de longitud de onda más larga (
por fuente de luz de mercurio
).
Naranja de acridina-ADN (verde amarillento)/ARN (rojo naranja)
orgánulos se purifican mediante
fraccionamiento celular
La fuerza centrífuga separa a distintos orgánulos según su coeficiente de sedimentación.
