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DIAGNOSI VIROLOGICA lezione 9 13 marzo 2024 + lezione 10 18 Marzo 2024…
DIAGNOSI VIROLOGICA
lezione 9
13 marzo 2024
+
lezione 10
18 Marzo 2024
VIROLOGIA CLINICA
paziente con sospetta malattia infettiva
prelievo del campione biologico
ipotesi eziologica
QUESITO DIAGNOSTICO
lo scopo della virologia NON è solo la diagnosi
è utile pure per capire le seguenti cose:
PREGRESSA INFEZIONE
la presenza di un'infezione latente implica la possibilità di
riattivazione
VALUTAZIONE dell'EFFICACIA della TERAPIA
SCOPO EPIDEMIOLOGICO
VALUTAZIONE dello STATO VACCINALE
METODI di DIAGNOSI
-
diagnosi DIRETTA
RICERCA del virus o parti di esso
RICERCA degli ANTIGENI
esempio 1
quantificazione della pp65 antigenemua di HCMV
sogg con infezione da citomelica
è stata fatto un esame ccon ommunofluorescenza
esempio 2
antigeni virali intracellulari
l'immunofluuorenscenza permette di vedere che gli antigeni virali sono concnetrati all'interno del nucleo
esmpio 3
virus del morbillo
gli antigeni soono tutti concentrati nel citoplasma
+
infatti il morbillo è un virus a RNA a filamento pos che NON ha nessuna relazione ocn il nucleo
esempio 4
herpes simplex
vescicole mucocutanee
è possibile verificare se quella vescicola sia il frutto della citopatia dell'herpes simples
reazione di agglutinazione passiva
antigene solubile + anticorpo
= reaz di precipitazione
l'anticorpo viene legato a delle particelle di lattice
quando l'antiegne virale reagisce con gli anticorpi
l'antigene virale si lega alle particell di lattice
così è possbile identificarlo
1 more item...
reaz di immunofluorescenza indiretta per l'identificszione del virus del morbillo in coltura cellulare
RICERCA del GENOMA VIRALE
reaz polimerasica a catena
PCR real time
oermettono di capire cosa succede nello svolgersi della reaz
METODICA QUANTITATIVA
GENOTIPIZZAZIONE
alcuni virus predenta una alata variaabilità genetica
alcune variabili genetici si sono stabilizzate particolarmente nella popolazine fino a creare dei veri e propri genotipi che presentano una prevalenza inalcune aree geografiche
genotipo ??
sono i più comuni
ome identificare un genotipo ?
si fa una reaz di ibridazione
di fa un lavaggio
si utilizzano delle sonde legate a biotina specifiche per un genotipo
la sonda si lega grazie ad una reaz specifica
test di genotipizzazione per HIV
è possibile usarlo per:
individuare geni di farmaco resistenza
antigeni ??
OSSERVAZIONE MICROSCOPICA
ISOLAMENTO in VITRO
-
diagnosi INDIRETTA
.
DIAGNOSI SIEROLOGICA
DIAGNOSI di PRIMO LIVELLO
diagnosi che permette di vedere quali anticorpi ha sviluppato il pz
a volte infatti trovare detemrinati anticorpi è sufficiente per effettuare diagnosi
DIAGNOSI di SECONDO LIVELLO
sono diagnosi di 2 livello ad esempio:
sapere quanto genoma virale c'è
profilo genetico
efficacia della terapia
ricerca degli antigeni
RICERCA degli ANTICORPI
DETERMINAZIONE dello
STATO IMMUNITARIO
è utile ricercare le IgG per valutare l'efficacia di un vaccino precedentemente effettuata
TEST QUANTITATIVO
per potere dure che un sogg ha risposte bene ad un vaccino è necessario effettuare un test quantittavio
ovvero il sogg deve avere un numero d anticorpi magg a ????
slide con
CURVA di RIFERIMENTO per il calcolo dlle unità
DIAGNOSI DI INFEZIONE RECENTE
= ricerca delle
IgM
tuttavia siamo sicuri di potere cercare IgM di tutte le infezioni?
NO
esempio 1
infatti NON esiste un test che permette di valutare la presenza di
IgM anti
HCV
allora in questo per valutare lo stato di infezione èpossibile ricercare il genoma
le IgM prodotte incorso di infezione da HCV NON sono infatti sufficienti per potere essere ricercate
esmepio 2
HIV
in questo caso invece la presenza di anticorpi detemirna per certo aèresenza di infezione da HIV
come faccio a spare quanto tempo fa è avvenuta l'infezione?
è possibile effettuare la ricerca di p24
la quale ha una particolare cinetica (ovvero viene rilascista in circolo nelle fasi inizialei dell'infezione, coe se fosse una IgM)
successivamente scompare
e poi ricompare di nuovo quando insorge la AIDS
quindi l'antiegene p24 ha lostesso siginifcato delle IgM
⚠️
controllare sempre se il risultato della diagnosi sia inerente al paziente
ad esmepio se ho un pazuente immunocompromesso NON posso chiedere un test di ricerca degli anticorpi perche se venisse negativo NON avrebbe alcun significato
CONFRONTO
è importante considerare che ogni test presenta i propri parametri
infatti lo stesso test fatto in due laboratori diversie con metologie diverse hanno parametri completamente diversi
esmepio
ad esmepio se un paz inizialemnte ha pochi Ig e poi ne ha tanti Ig
è un segnale di infezione SOLO SE entrambi i test sono stati fatti nello STESSO laboratorio
è SEMPRE NECESSARIO verificare la diagnosi data da una macchina
bisogna infatti controllare clinicamente che il paziente presenti i sintomi corrispondenti ai dati dal laboratorio clinico
possono capitare infatti:
scambio di provetta
oppure smepilicemnte il test NON è specifico
(ci son oinfatti molti fattori che possano interferire con la specificità di un esame)
UTILITA'
vedi SLIDE
QUANDO NON SI PU FARE?
infezione localizzata
HPV (papillomavirus)
virus influenzali
che cambiamno ogni anno
scelta del campio biologico
metodi di trasporto
1️⃣
SCELTA del CAMPIONE BIOLOGICO
esempio
QUADRO PATOGENETICO di EPATITE A
il virus è a trasmissione oro-fecale
penetra la mucosa
periodo di incubaizone
all'inizio del rapporto virus ospite il virus viene
eliminato con le feci
quando il sogg inizia ad avere la manifestaizone clinica ils ist immunitario ha riconoscoiuto gli antigeni del virus e si è attivato
sist produce:
IgM che poi vanno incontro a switch
così si produce poi IgG
vedi SLIDE
inizialmente è necessario fare un prelievo di sangue
il virus è presente nel sangue soltanto per un breve periodo
dopo la scomparsa del virus dal sangue si avvia però la produzione di Ig
RISPOSTA ANTICORPALE
virus epatite A NON cresce bene in vitro = ovvero non da effetto citopatico
la diagnosi che is basa sulla
ricerca degli Ig
è assolutamente valida
IgM
= infezione molto recente
IgG
= infezione più vecchia
MICROSCOPIA ELETTRONICA
si effettua questo esame perchè nel cao dei vurus l'
osservazione morfologica
coincide con l'uso del microscopio elettronico
TUTTAVIA
NON è una pratica molto usata per via di:
elevati costi
ISOLAMENTO IN VITRO
limiti
impiega tatnto tempo
è necessario avere colture cellulari per molti virus
incapacità o difficol
tà di alcuni virus a replicarsi
= NON dando effetto ditopatico che è l'espressione visibile della patogenicità
COLTURA VIRALE
ai fini diagnostici NON è perfettamente performante
EVOLUZIONE della DIAGNOSI
DNA microarray
sfruttando il genoma dei microrganismi è possibile vedere con una reaz quali patogeni ci sono
vantaggi
velocità
TEST SINDROMICI
i test sindromi permettono di identificare i più prpbabili patogeni che causino quel determinato caso clinico
INDIVIDUARE il METODO PIU' ADATTO
esempio SARS-COV2
tampone antigenico e molecolare
HPV
è possibile SOLO ricercare il genoma