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PCR - Coggle Diagram

- - - - PCR y análisis de Tm
        
        VI. Recuperar las muestra amplificadas y determinar tamaño de los amplicones por análisis electroforético
        
        Análisis electroforético
        
        X. Con los datos de Tm y tamaño, elaborar un putativo diagnóstico del paciente analizado
        
        Informe e interpretación de resultados
        
        I. En tabla resumen presentar los tamaños, Tm y ciclo en que comenzó a amplificar cada
        muestra.
        
        II. Calificar los datos obtenidos respecto de la especificida y selectividad del PCR.
        
        III. Calificar los datos obtenidos respecto de los valores normales esperados.
        
        I. Preparar 30 mL agarosa 2% (P/V) en TAE
        
        II. Hervir y verter agarosa líquida en cámara de electroforesis
        
        IV. Mezclar 10 uL de cada reacción de PCR con 2 ul buffer de carga
        
        V. Cargar 10 uL y estándar de PM en los pocillos del gel, registrando su ubicación
        
        VI. Cerrar cámara de electroforesis y fijar la corriente en 60 mA, aprox. 100 V
        
        VII. Correr electroforesis hasta que frente de corrida llegue al final del gel (aprox. 45 min)
        
        VIII. Teñir gel de agarosa y observar en transiluminador, bajo luz UV
        
        IX. estimar tamaño relativo del amplicón y comparar tamaño empírico con tamaño teórico
        
        I. Preparar Master Mix agregando al tubo eppendorf los volúmenes de reactivos indicados
        
        II. Preparar las mezclas de reacción, agregando a cada capilar los volúmenes de reactivos indicados
        
        III. Introducir capilares en termociclador
        
        IV. Obtener Tm del amplicón y comparar su valor empírico y teórico
        
        V. Estimar la carga viral de la muestra problema comparando con la curva estándar