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le librerie di DNA - Coggle Diagram

- - - - sono variazioni che riguardano un'unica base nucleotidica
        
        Esempio: se in un punto del genoma un genitore é omozigote per la base A e l'altro genitore lo é per la base G
        
        Un cromosoma conterà A e un altro G
    - - data la diversa distribuzione di sequenze ripetute (STR inclusi) da un individuo all'altro, si potevano cosi distinguere i cosiddetti RFLP
    - - sono tratti di DNA contenenti sequenze di 2-10 basi che si ripetono più volte secondo uno schema preciso
        
        Esempio: un soggetto può ereditare dalla madre un cromosoma 15 con una breve sequenza ripetuta più volte, e dal padre un altro cromosoma 15 con la stessa sequenza ripetuta 2 volte
        
        Se una STR si trova tra due sequenze di riconoscimento per un certo enzima di restrizione, il DNA dell'individuo eterozigote verrà tagliato e dara origine a due frammenti:uno più lungo (materno) e uno più breve (paterno)
- - - - è una collezione di cloni contenuti ciascuno un frammento di DNA genomico
        
        per isolare un gene, i biologi frammentano i cromosomi in pezzi più piccoli con gli enzimi di restrizione e inseriscono ciascun frammento in un vettore plasmidico con cui trasformano cellule batteriche
        
        ogni batterio darà origine a un clone di cellule ricombinanti che contengono molte copie dello stesso frammento di DNA umano
    - - collezione di cloni corrispondenti alle sequenze effettivamente espresse in una cellula
        
        bisogna isolare gli mRNA di una cellula e convertirli nelle loro copie a DNA a doppia elica, questo passaggio è possibile grazie ad un enzima la trascrittasi inversa
        
        il passo successivo è clonare i cDNA in modo da avere un gran numero di copie
        
        le librerie cDNA sono utili perche ci forniscono un'istantanea dell'insieme degli mRNA trascritti da un certo tipo di cellule in un dato momento o a un certo stadio di sviluppo
      - per isolare un singolo cDNA si può sfruttare la proprietà detta ibridazione
        
        il prerequisito necessario per applicare questa proprietà è la conoscenza della sequenza nucleotidica di una piccola porzione del gene di nostro interesse
        
        si può ottenere in diversi modi
        
        si può applicare a ritroso il codice genetico a partire dalla degli amminoacidi della proteina corrispondetne
        
        si può sintetizzare chimicamente un oligonucleotide contenente questa sequenza nota, creando così una sonda a DNA
        
        le sospensioni contenuti nelle cellule batteriche della libreria vengono diluite e seminate su un terreno solido in piastre Pietri
        
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        si può sfruttare l'analisi comparativa delle sequenza dello stesso gene ottenute in altre specie