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pag. 131-133, (Ogni individuo umano percepisce il mondo in un modo…

- - - - data la diversa distribuzione di sequenze ripetute da un individuo all'altro, si potevano distinguere i cosiddetti polimorfismi di lunghezza di frammenti di restrizione.
        
        la determinazione dell'impronta genetica in questo modo richiede una quantità di dna non sempre disponibile. Con l'avvento della pcr è stato possibile superare questo limite amplificando le sequenze di interesse
- - - - i biologi preferiscono costruire una genoteca partendo da mrna maturi e convertendoli in copie di a dna, che sono chiamati cdna
        
        bisogna isolare gli mrna di una cellula e convertirli nelle copie a dna a doppia elica
        
        clonare il cdna in modo da avere un gran numero di copie: prima si trasformano i batteri con una miscela di vettori ciascuno contente un diverso cdna, poi si selezionano le cellule trasformate. Si ottiene una libreria di cellule contenenti ciascuno un diverso cdna
- - - - a questo punto le sospensioni contenenti le cellule batteriche della libreria vengono diluite e seminate su un terreno solido in piastre Petri. Le singole cellule si separano le une dalle altre e producono delle colonie formate tutte da cloni
        
        dato che ciascuna cellula contiene un singolo cdna, anche le singole colonie di cellule figlie possiederanno tutte quel medesimo cdna. Sulla superficie della piastra contenente le colonie viene quindi appoggiato un filtro realizzato in materiale carico positivamente: la nitrocellulosa
        
        alcune cellule di ogni colonia aderiscono al filtro, che viene immerso in una soluzione in grado di lisare le cellule e liberare gli acidi nucleici. Essendo carichi negativamente, questi rimangono attaccati alla nitrocellulosa. Il dna esposto viene poi denaturato per separare i due filamenti
        
        si aggiunge ora la sonda resa radioattiva tramite l'incorporazioni di nucleotidi contenenti l'isotopo 32 del fosforo. La sonda a singolo filamento si ibrida in corrispondenza della sequenza complementare presente nella colonia in cui le cellule contengono il cdna del gene che vogliamo isolare. Poiché la sonda è radioattiva, la posizione della colonia sul filtro viene rivelata esponendo il filtro a una lastra autoradiografica.
        
        dato che il filtro è una specie di fotografia della piastra da cui deriva, si possono identificare le cellule contenenti il cdna che si sta cercando. Si prelevano e si fanno moltiplicare le cellule fino ad ottenere una coltura pura che contiene solo il vettore con il cdna del gene di interesse
- - - - Il gene TAS2R38 è stato identificato e sequenziato nel 2003 da Un-kyung Kim e colleghi. Questo gene codifica per una proteina della superficie cellulare che si lega al PTC e avvia una cascata di segnali intracellulari. Il gene è lungo 1143 paia di basi nucleotidiche e si trova nel cromosoma 7 insieme ad altri nove geni per i recettori del gusto amaro. Confrontando le sequenze di DNA tra assaggiatori e non assaggiatori, gli scienziati hanno determinato che esistono tre polimorfismi a singolo nucleotide (SNP) che differenziano l'allele dell'assaggiatore (T) dall'allele del non assaggiatore (t)
        
        Gli alleli T e t possono essere distinti con un test di digestione di restrizione. Gli enzimi di restrizione sono conosciuti come “forbici molecolari” perché tagliano il DNA in una sequenza nucleotidica specifica, chiamata sito di restrizione. Il taglio del DNA con un enzima di restrizione è chiamato digest di restrizione.
        Questi enzimi sono prodotti naturalmente dai batteri come difesa contro i virus invasori.
        
        Quando l'enzima HaeIII incontra questa sequenza di riconoscimento, scinderà entrambi i filamenti di DNA tra i nucleotidi G e C, risultando in due frammenti di DNA. I frammenti tagliati danno due bande su un gel di agarosio, mentre i frammenti non tagliati danno una banda. Ciò porta a un modello unico di bande per ciascun genotipo. Il prodotto PCR dei non degustatori avrà una sola banda. Il prodotto PCR degli assaggiatori omozigoti dominanti avrà due bande e gli assaggiatori eterozigoti avranno tre bande