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GENETICA (approfondimenti) - Coggle Diagram
GENETICA
(approfondimenti)
per ogni individuo è possibile conoscere il DNA che è diverso da individuo a individuo;
così facendo è possibile ottenere l'IMPRONTA GENETICA
con essa si possono svolgere molte attività utili, basti pensare infatti che determinate tecniche ci permettono di stabilire rapporti di parentela e cercare geni responsabili di malattie ereditarie
Per identificare una persona o stabilire parentele, sono molto importanti le SEQUENZE POLIMORFICHE (o polimorfismi), cioè varianti di tratti di DNA
Un esempio di tratti di DNA sono le RIPETIZIONI BREVI IN TANDEM (STR): questi si ripetono più volte secondo uno schema ben preciso.
Esaminando molte STR diverse si possono riconoscere combinazioni che caratterizzano UNIVOCAMENTE l' individuo
i polimorfismi da singolo nucleotide (SNP) sono delle variazioni che riguardano una Base di Nucleotidi
inoltre, poiché le sequenze ripetute si distribuiscono in maniera differente da individuo a individuo, si possono distinguere i Polimorfismi di lunghezza dei frammenti di restrizione (detti anche RFLP)
il metodo più usato per analizzare il DNA è l' analisi STR
Le Librerie di DNA
la prima cosa da fare per isolare un gene è quello di costruire una GENOTECA, cioè una raccolta di sequenze di DNA
Genoteche
Libreria genomica
è un insieme di Cloni che contengono ciascuno un frammento di DNA genomico
per isolare un gene, i biologi dividono i cromosomi in più pezzi, grazie agli enzimi di restrizione, e poi vengono inseriti nei plasmidi e le cellule batteriche vengono così modificare.
Libreria cDNA
poiché i biologi preferiscono costruire una genoteca partendo dagli mRNA, questi vengono convertiti in cDNA (copie di DNA)
il nome cDNA significa DNA complementare e quindi una libreria di cDNA è l'insieme di cloni.
per costruirla bisogna isolare gli mRNA di una cellula e convertirli in cDNA con l'uso dell'enzima TRASCRITTASI INVERSA, cioé un tipo di DNA polimerasi che, usando un filamento di RNA come stampo, genera una copia.
Per isolare un cDNA si può sfruttare l' IBRIDAZIONE, cioé la proprietà del DNA a singola elica di legarsi ad un filamento complementare
Per effettuarla, bisogna conoscere una sequenza nucleotidica del gene che si può ottenere grazie alla SONDA A DNA
le cellule batteriche della libreria vengono diluite e seminate in piastre Petri in modo tale da dividersi e produrre colonie formate da cloni
sulla superficie della piastra, viene appoggiato un filtro contenente un materiale carico positivamente cioé la NITROCELLULOSA
Grazie ad essa, alcune cellule di ogni colonia aderiscono al filtro che poi viene immerso in una soluzione con la quale vengono liberati gli acidi nucleici (che sono carichi negativamente)
Così facendo il DNA viene esposto e poi viene applicata la sonda con la quale si identificano le cellule con il cDNA che si vuole avere
Infine si prelevano e si fanno moltiplicare le cellule fino ad ottenere una coltura che contiene solo il cDNA del gene di interesse