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Recursos tecnológicos en citodiagnóstico - Coggle Diagram
Recursos tecnológicos en citodiagnóstico
Inmunohistoquímica (IHQ)
Las técnicas IHQ permiten detectar y localizar antígenos (Ag) in situ. Usan anticuerpos (Ac) que reconocen de forma específica al Ag.
Crean las condiciones óptimas para la unión Ag-Ac y la detectan mediante un sistema de visualización
Consolidado como práctica asistencial. Indispensable en terapia oncológica personalizada para la elección de la terapia
Permiten diagnóstico diferencial de tumores del estroma endometrial, endocervical u ovárico, enfermedad trofoblástica o la clasificación escamosa intraepitelial
Se puede aplicar tanto en microscopía óptica como electrónica
Métodos
:
Directo: Ac primario marcado. Existe un Ac específico frente al Ag que se quiere localizar. Reacción en un solo paso
Indirecto: basado en las características de las inmunoglobulinas (Ig) --> permite obtener Ac específicos de la especie. Ac primario no marcado . Se detecta por Ac secundario marcado frente a Ig obtenida del primario
Se clasifican en función del marcador usado para ver la unión Ag-Ac. Hay 3 tipos de marcadores:
Enzimas: en técnicas indirectas. Se revelan mediante técnica histoquímicas y cromógenos --> productos coloreados fácilmente visibles al microscopio
Fluorocromos: moléculas capaces de absorber radiación luminosa a una determinada longitud de onda y la emiten con una longitud de onda mayor. Se usa microscopio de fluorescencia para ver la unión Ag-Ac
Oro coloidal: marcador para microscopía electrónica. Se usa para localizar estructuralmente a los Ag
Inmunocitoquímica
Otro tipo de técnica que permite la identificación de Ag´s específicos.
Determinación e identificación de neoplasias
Implantación de tratamientos a nivel hormonal
PCR
in situ
Reacción en cadena de la polimerasa
Rápida y específica detección de los fragmentos de genoma de las muestras
Permite amplificar material genético de biopsias, raspados, fluidos, aspirados o tejidos embebidos en parafina
Primero se amplifica el ADN diana y después se hace una hibridación
in situ
convencional con sondas específicas de ADN o ARN
Permite detectar pequeñas cantidades de material genético y generar una gran cantidad de secuencias que se visualizan en una matriz de gel bajo luz UV
Identifica enfermedades complejas como cáncer, alteraciones genéticas o infecciones virales
Ha permitido aumentar el diagnóstico temprano de infección por VPH
Microscopía óptica
Microscopio de campo oscuro
Cuenta con un condensador que orienta los haces de luz desde el lateral, iluminando la muestra de forma oblicua
Logra que las estructuras celulares aparezcan brillantes sobre un fondo oscuro
Todo lo anterior permite observar bacterias o estructuras como el nucléolo
Se pueden observar incluso células vivas y móviles
Microscopio de contraste de fases
Basado en las diferencias del índice de refracción (ÍR) en las distintas partes de los tejidos y cada célula
La luz pasa por zonas con mayor ÍR retardando la onda, que queda fuera de fase respecto al haz de luz principal
Amplifica y transforma con diferentes intensidades: células visibles sin teñir
Posee un condensador con un diafragma con anillo de fases para cada objetivo en su interior. Estos poseen, a su vez, un anillo de fases en su plano focal
Muy útil para evaluar células vivas
Microscopio de interferencia
Basado en el microscopio de contraste de fases
Lleva un filtro de luz polarizada en el que los rayos se dividen en 2 haces que vibran en planos diferentes
Un haz atraviesa la muestra y otro pasa lateralmente, algo desfasados en el tiempo
Ambos emergen después de atravesar la segunda parte del prisma como 2 ondas luminosas separadas pero en fase
Las ondas se dirigen a la muestra obteniendo una imagen bien contrastada y con relieve
Sensación visual de aspecto ·D
Muy usada para identificación de cultivos celulares
Hay fenómenos de birrefrigencia (doble refracción) donde los átomos o las moléculas se alinean en un determinado plano del objeto
Cuando se iluminan con luz polarizada brillan intensamente sobre un fondo oscuro
Microscopio de polarización
Ilumina la muestra con luz polarizada, permitiendo ver detalles debidos a las características anisotrópicas e isotrópicas de moléculas y átomos
Posee un prisma polarizador en el recorrido de los rayos luminosos que sólo deja pasar luz polarizada hacia la muestra
Los filtros se pueden orientar para que, al situar sus secciones de forma perpendicular, la luz atraviese el polarizador pero no el analizador
Al observar preparaciones con el mismo índice de refracción (isotrópicas), la luz polarizada que atraviesa la muestra no se modifica y se ven oscuros
Si las moléculas modifican el plano de luz polarizada (anisotrópicas), los haces de luz pasan al analizador con colores brillantes debidos al espesor de las muestras
Se usa para estudiar tejidos de simetría lineal (muscular, óseo, fibras de algodón, etc.) y para determinar la presencia de colágeno
Microscopio de fluorescencia
Detecta la capacidad de ciertas sustancias, naturales o artificiales, de emitir energía con una longitud de onda mayor que la que han absorbido previamente
Posee una potente fuente de luz y dos sistemas de filtros que filtran la luz antes de llegar a la muestra, filtrando la longitud de onda que excita los fluorocromos que se quieren visualizar
Después se deja pasar la luz por el segundo sistema de filtros con la longitud de onda emitida por los componentes fluorescentes
Logra que las estructuras fluorescentes tengan un aspecto luminoso y brillante sobre un fondo oscuro
Usados para detectar ciertas moléculas o proteínas a las que antes se les ha incorporado un fluorocromo
Microscopio de luz ultravioleta
Usa luz UV como fuente de energía
Esta luz atraviesa la muestra y permite tener registros fotográficos ya que las preparaciones no se pueden ver directamente en el ocular porque la luz UV no es visible y, además, daña la retina
Al haber distintos grados de absorción de la luz por parte de los componentes celulares, permite detectar múltiples tipos de moléculas, destacando ácidos nucleicos y proteínas
Microscopio láser confocal
Combina partes del microscopio óptico con un sistema de fluorescencia adjunto y un sistema de barrido en el que actúa el láser
El rayo láser se mueve gracias a un sistema de espejos a través del plano de la muestra, iluminándola en un solo punto
El detector selecciona la fluorescencia emitida por dicho plano, excluyendo luz de niveles superiores o inferiores del plano
Un ordenador registra los datos y obtiene una imagen bidimensional
Pueden obtenerse imágenes con distintas profundidades (capa a capa), lo que da una imagen 3D de la muestra
Permite hacer análisis morfométricos y obtener imágenes con un elevado grado de definición y detalle
Microscopia electrónica
Microscopio electrónico de transmisión (TEM)
Los electrones son difractados al pasar a través de la muestra, generando un gráfico que se transforma en una imagen mediante lentes magnéticas
Después se proyecta en un monitor
El poder de resolución depende de la longitud de onda y la calidad de las lentes del objetivo
Hay que tener en cuenta el espesor de la muestra (no más de 0'5 μm) y las condiciones de focalización
Se comparan las imágenes observadas y las calculadas mediante un modelo estructural dado para obtener las estructuras de los compuestos analizados
Microscopio electrónico de barrido (SEM)
Genera la imagen a través de un haz de electrones que se dirigen hacia la muestra por medio de una columna de vacío
Hay 2 tipos de electrones:
Primarios: emitidos por el cañón de electrones
Secundarios (baja energía): emitidos por la superficie de la muestra; generan la imagen)
La emisión de electrones se facilita metalizando la muestra con una cubierta de un material conductor como el oro
Se usa para estudiar el relieve de las muestras