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於猴面花中使用Cycloidea作為靜默標記基因 開發胡瓜嵌紋病毒介導之基因靜默系統, VIGS載體建構步驟 - Coggle Diagram
於猴面花中使用Cycloidea作為靜默標記基因
開發胡瓜嵌紋病毒介導之基因靜默系統
實驗架構
實驗結果觀測
花瓣:兩側對稱→輻射對稱(cyc被靜默)
實驗組v.s.對照組: RT-qPCR測cyc表現量有差異
植物病毒接種
接種手法
真空浸潤法
葉片注射法
材料:猴面花(Mimulus lewisii)植株
攜帶CMV-VIGS的agrobacterium
VIGS載體建構
農桿菌(EHA105 or LBA4404菌株)
切位
載體: CMV
目標基因: Cycloidea
VIGS載體建構步驟
把CMV-M.l.cyc轉入農桿菌
農桿菌株 EHA 105 或LBA4404
LB medium
CMV-M.l.cyc plasmid
kanamycin(抗生素)
以PCR擴增所需片段(M.l.cyc)
Taq Polymerase
Foward/Reverse primer(配合選取的切位)
Template (cDNA)
把M.l.cyc片段插入CMV
step2: 用in fusion cloning 結合
step1: 切CMV plasmid